Sífilis
PRINCIPIOS GENERALES
• La sífilis es una infección de transmisión sexual causada por una bacteria espirilar, el Treponema pallidum. El periodo de incubación es de aproximadamente un mes.
• Las manifestaciones clínicas son variadas, por lo que de acuerdo con los estadíos de la enfermedad es importante elegir la prueba de laboratorio adecuada para su confirmación diagnóstica y seguimiento de su evolución, así tenemos:
- En la sífilis primaria se puede observar el chancro duro (genital, oral, rectal), cuya secreción contiene gran cantidad de treponemas, los cuales pueden visualizarse por examen directo en un microscopio de campo oscuro.
- En la sífilis secundaria se observa lesiones en la piel y se realizan las pruebas treponémicas y no treponémicas.
- Luego de un periodo de latencia variado se presenta la sífilis terciaria, en la que hay compromiso cardiovascular o del sistema nervioso; en este caso, las pruebas treponémicas son las que hacen el diagnóstico.
• Son pruebas no treponémicas
- VDRL Prueba del Laboratorio de lnvestigaciones en Enfermedades Venéreas.
- RPR Prueba de reagina plasmática rápida.
• Son pruebas treponémicas
- FTA-Abs Anticuerpos de treponema fluorescentes absorbidos.
- MHA-TP Microhemaglutinación para Treponema pallidum.
EXAMEN DIRECTO
• Se requiere un microscopio con condensador para campo oscuro.
• El examen carece de valor si el paciente ha tratado la lesión (chancro duro) con algún ungüento. En este caso se debe esperar tres días para efectuar el examen.
• El examen de frotis secos y teñidos no se recomienda, ya que en la piel y en las membranas mucosas suelen existir treponemas saprofitos.
MATERIALES
- Gasa estéril.
- Solución estéril de cloruro de sodio al 0,9%.
- Una lanceta estéril.
- Pipeta Pasteur con chupón.
- Portaobjetos de vidrio delgado.
- Un microscopio con condensador para campo oscuro.
MÉTODO
1. Limpiar el chancro con gasa humedecida con una solución estéril de cloruro de sodio al 0,9%. Secar bien.
2. Raspar los bordes del chancro varias veces con la hojilla de una lanceta estéril colocada en posición plana. Evitar provocar la salida de sangre.
3. Presionar con gasa estéril seca.
4. Retirar la gasa y esperar durante unos minutos a que aparezca un líquido seroso de color rosáceo.
5. Aspirar ese líquido con una pipeta Pasteur provista de un chupón.
6. Depositar una gota en el portaobjetos de vidrio delgado, especialmente fabricado para microscopía en campo oscuro.
LECTURA
• Examinar el portaobjetos con el microscopio empleando un condensador para campo oscuro.
• Los treponemas se distinguen por sus cuerpos sumamente delgados y sus movimientos característicos, rotando alrededor de su eje longitudinal y enroscándose.
EXAMEN DE VDRL (PRUEBA NO TREPONÉMICA)
• VDRL significa "Prueba del Laboratorio de Investigaciones en Enfermedades Venéreas", que es el lugar donde se elaboré por primera vez este examen.
• Se examina el suero o líquido cefalorraquídeo (LCR) en busca de reaginas anticuerpos que se producen en personas que padecen de sífilis.
• La existencia de estos anticuerpos se pone de manifiesto por un antígeno, que es una suspensión de partículas minúsculas que contiene cardiolipina, lecitina y colesterol.
• La suspensión de antígeno forma grumos cuando se enfrenta con anticuerpos presentes en el suero o LCR (microaglutinación en lámina) de pacientes con sífilis.
a. Antígeno
• El antigeno es una solución alcohólica que contiene cardiolipina al 0,03%, colesterol al 0,9% y lecitina al 0,21%.
• El antígeno debe permanecer a una temperatura entre 23 a 29°C antes de su preparación.
• Debe examinar el antígeno sosteniéndolo contra la luz. Si contiene partículas
o un precipitado no se debe usar.
• Debe ser preparado el mismo día en que se use.
PRUEBA DE REAGINA PLASMÁTICA RÁPIDA (RPR) (PRUEBA NO TREPONÉMICA)
Fuente: Procedimientos de Laboratorio. Ministerio de Salud. INS. Perú.
treponemas, sífilis, exámen, pallidum, VDRL, RPR
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VIH
PRINCIPIOS GENERALES
• Para hacer el diagnóstico de infección por VIH, se emplean pruebas para un diagnóstico preliminar (tamizaje) y confirmatorias, que detectan anticuerpos en muestras de sueros.
• Las pruebas inmunológicas ligadas a enzimas (ELISA) sa usan para diagnóstico preliminar basado en la detección de los anticuerpos contra VIH .
• El suero o plasma son los elementos más comunes usados para la detección de anticuerpos. Deben guardarse congelados en el caso de que la prueba no pueda realizarse inmediatamente luego de la recolección.
• Los procedimientos más comúnmente usados se clasifican como pruebas de ELISA indirecto, competitivo y de captura.
• Los antígenos usados en estas pruebas pueden ser derivados de virus lisados o producidos por recombinación genética o sintéticamente.
• Los anticuerpos son producidos en animales y pueden ser monoclonales o policlonales.
• Estos reactivos se incluyen en los paquetes (kits) de las pruebas comerciales, ya sea fijados a fase sólida o empaquetados separadamente junto con otros reactivos.
• Todos los juegos de las pruebas incluyen especímenes de control positivo y negativa que deben ser incluidos durante cada examen para asegurar la validez de los resultados de la prueba.
PRUEBA DE ELISA INDIRECTO
FUNDAMENTO
• La muestra de suero se diluye en el soporte en el que se encuentra inmovilizado el antígeno. Se incuba por un período específico de tiempo y a una temperatura exacta de acuerdo a las instrucciones del fabricante.
• Si las muestras de suero contienen los anticuerpos específicos, éstos formarán un complejo antígeno - anticuerpo y permanecerán unidos al soporte. La muestra de suero se elimina por lavado.
• Luego, agregar anticuerpos antiinmunoglobulinas totales humanas conjugadas con peroxidasa. Incubar a la temperatura indicada por el fabricante.
• Este conjugado se unirá al complejo antígeno - anticuerpo, si este último se produjo en el paso 2 del proceso.
• Realizar un nuevo lavado y agregar el substrato enzimático.
• En los casos en que se haya unido el conjugado, la reacción genera un producto
coloreado proporcional a la concentración de anticuerpos en la muestra.
* La concentración de anticuerpos es detectada por el espectrofotómetro a una longitud de onda determinada según los procedimientos del fabricante.
• La lectura de resultados positivos se basa en la aparición de un color que se puede detectar ya sea visualmente o con un espectrofotómetro.
• Es la prueba más usada.
PRUEBA DE ELISA COMPETITIVO
FUNDAMENTO
• Es un método indirecto modificado para detectar anticuerpos VIH.
• El anticuerpo VIH en la muestra positiva compite con el anticuerpo marcado con la enzima por los lugares reactivos en los antígenos ligados al soporte de fase sólida.
• Por lo tanto, ambos, la muestra y el anticuerpo marcado con la enzima son añadidos al mismo tiempo.
• El anticuerpo de la muestra positiva se ligará al antígeno, y por lo tanto evitará que los anticuerpos marcados con enzima se junten con el antígeno.
• Esto limitará la cantidad de enzima disponible para reaccionar con el substrato y no se producirá ningún color para casos de muestras positivas con anticuerpos a VIH.
• En contraste, las muestras que son negativas para anticuerpos a VIH permitirá a la gran mayoría de los anticuerpos marcados con enzima ligarse al antígeno fijado al soporte.
• Al agregar el substrato de la enzima resultará en el desarrollo de un color similar al control negativo.
PRUEBA DE ELISA CON ANTÍGENO DE CAPTURA
FUNDAMENTO
• Esta prueba puede ser realizada como una prueba indirecta o competitiva.
• Un anticuerpo monoclonal (específico para un determinante antigénico) es ligado a la fase sólida.
• Un reactivo con el antígeno específico del VIH se añade enseguida a la fase sólida, con el fin de que el antígeno se ligue al anticuerpo monoclonal.
PROCEDIMIENTO
I. Después de un período de incubación y de lavado, el suero que se va a examinar es añadido e incubado.
2. La fase sólida es luego lavada y se añade la inmunoglobulina anti-Ig humana marcada con la enzima, se incuba y se lava.
3. Añadir el substrato de la enzima, mezclar e incubar.
4. Si es positiva, en la muestra de suero se produce color.
Fuente: Procedimientos de Laboratorio. Ministerio de Salud. INS. Perú.
virus, elisa, VIH, inmuno, deficiencia, humana
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Hepatitis B
PRINCIPIOS GENERALES
TEST DE LÁTEX DIRECTO PARA LA DETECCIÓN DEL ANTÍGENO DE SUPERFICIE DE LA HEPATITIS B (HBsAg)
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Brucelosis
PRINCIPIOS GENERALES
• La brucelosis es una enfermedad infecciosa, bacteriana, que afecta principalmente a los bovinos, caprinos porcinos y equinos. Es una enfermedad zoonótica de importancia mundial por afectar al hombre en ciertas circunstancias especiales.
• La Brucella es un microorganismo cocobacilar, no móvil, no esporulado, gran negativo de 0,5 x 1,5 um. Puede agruparse en pares o en cadenas cortas. Existen tres espeeies principales del género Brucella: Brucella abortus, Brucella suis, Brucella melitensis, siendo esta última la que produce mayor severidad clínica en el hombre.
• El diagnóstico microbiológico de brucelosis se basa en la demostración de la presencia de brucelas en el organismo y/o en la presencia de los anticuerpos anti-Brucella con títulos demostrativos en la sangre y, ocasionalmente, en otros líquidos como el líquido cefalorraquídeo, exudados, etc.
• Puesto que no se consigue siempre el aislamiento de la brucela, es obligatorio recurrir para el diagnóstico al empleo de métodos serológicos.
* Si tomamos en consideración la estructura antigénica del género Brucella y la respuesta inmune del paciente, las pruebas serológicas se pueden agrupar según el antígeno o la clase de inmunoglobulina (IgM o IgG) que interviene en la reacción.
• Las pruebas que se usan en el diagnóstico serológico de brucelosis son:
- Prueba de aglutinación en placa.
- Prueba de aglutinación en tubo.
- Prueba de 2-Mercaptoetanol.
- Rosa de Bengala.
- Anticuerpos bloqueadores y el fenómeno de zona que se observa en prueba en tubo.
Atención:
*Tanto los antígenos como los sueros deben estar a temperatura ambiente por lo menos una hora antes de realizar la prueba.
*Los antígenos para diagnóstico deben mantenerse en refrigeración a una temperatura de 4 - 8°C. Se debe evitar su congelación, porque quedan inutilizados definitivamente.
MATERIALES SEROLOGÍA DE BRUCELOSIS
- Aglutinoscopio.
- Placa o lámina de vidrio dividida en 72 cuadrados de 3,0 a 3,5 cm por lado.
- Pipetas graduadas para medir: 0,08, 0,04, 0,02, 0,01, 0,005 ml (puede usarse pipetas de 0,2 ml graduadas al milésimo o al centésimo).
- Gotero calibrado que dé exactamente 0,03 ml por gota.
- Agitadores de metal, de plástico o palitos de dientes.
- Un cronómetro.
- Sueros control positivo y negativo.
- Tubos de ensayo 13 x 100 mm.
- Pipetas serológicas de 10 y 5 ml.
- Jeringas de 2 ml de capacidad con aguja N° 16 y 21/2 pulgadas de longitud.
- Micropipetas de 5 - 50 ul, de 20 - 200 ul y otra de 200 - 1 000 ul de rango.
METODOS SEROLÓGICOS
CONTROL DE CALIDAD DE LAS PRUEBAS
• Uno de los mayores problemas que existe en el diagnóstico serológico es la calidad de los antígenos que se usan en la prueba.
• En el control de antígenos de Brucella se debe tener en cuenta los siguientes datos:
DATOS GENERALES
• Anotar en una ficha:
- El laboratorio productor del antígeno.
- El tipo de antígeno.
- La cepa utilizada.
- La fecha de expiración.
- El volumen de antígeno por frasco.
- Número de frascos y si viene con gotero o no.
ASPECTO DEL ANTÍGENO
• Anotar el color del antígeno comparándolo con el antígeno de referencia, si se tiene presencia de grumos o si cuando se deja reposar el antígeno se depositan impurezas en el fondo del frasco.
PUREZA
* Hacer una coloración de Gram debiendo observarse sólo la presencia de cocobacilos gramnegativos.
ESTERILIDAD
• Sembrar una gota del antígeno en :
- Un tubo de agar tripticase soya.
- Un tubo de caldo dextrosado con indicador de Andrade.
- Un tubo con agar Saboraoud.
• Observar por 7 días. No deben crecer gérmenes en ninguno de los medios.
CONTROL DE pH
• Medir el pH, tanto del antígeno de prueba como del antígeno estándar, utilizando un potenciómetro o papeles indicadores de pH, debiendo estar dentro de un rango adecuado para el antígeno que se prueba.
Fuente: Procedimientos de Laboratorio. Ministerio de Salud. INS. Perú.
brucelosis, aglutinación, serología, control, calidad
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Salmonelosis
PRINCIPIOS GENERALES
• La serología del género Salmonella constituye al complemento necesario para el diagnóstico de la fiebre tifoidea.
antígeno O, antígeno H, control, calidad, salmonelosis
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