Tinción Gram

PRINCIPIOS GENERALES

• La tincion Gram sirve para clasificar las bacterias en dos grupos:

- Bacterias grampositivas, que se tiñen de azul violáceo oscuro.

- Bacterias gramnegativas, que se tiñen de rojo, grosella o rosado.

REACTIVOS

Solución de cristal violeta al 1%.

Solución de safranina.

Solución de Lugol.

Alcohol acetona.

Agua corriente.

MÉTODO

1. Fijar el frotis por calor suave y dejarlo enfriar.

2. Cubrir el frotis con cristal violeta al 1%, dejando que el colorante actúe por 1 minuto.

3. Enjuagar suavemente la preparación con agua corriente y dejarla escurrir.

4. Cubrir el frotis con solución de Lugol, dejando actuar por 2 minutos.

5. Enjuagar suavemente la preparación con agua corriente.

6. Cubrir el frotis con alcohol acetona por 1 minuto.

7. Enjuagar suavemente con agua corriente.

8. Cubrir el frotis con solución de safranina, por 30 segundos.

9. Enjuagar suavemente con agua corriente y dejar secar la preparación al aire libre.

LECTURA

• Observar al microscopio, utilizando el lente de inmersión

• Se deberá buscar:

Bacterias grampositivas: Se tiñen de azul violáceo oscuro, como estafilococo, estreptococos neumococos, enterococos, etc.

Bacterias gramnegativas: Se tiñen de color rojo, grosella o rosado, como gonococos, vibrios, enterobacterias.

ATENCIÓN

• Puede ocurrir una reacción grampositiva falsa porque:

- El frotis se ha fijado antes de que estuviera seco. ·

- El frotis ha sido demasiado grueso.

- Quedaron sedimentos en el frasco de la solución cristal violeta( debe filtrarse antes de usarlo).

-La solución de Lugol no se escurrió completamente.

- La solución de safranina se dejó demasiado tiempo en el frotis.

• Puede ocurrir una reacción gramnegativa falsa porque:

- No se dejó actuar suficiente tiempo la solución de Lugol.

- El alcohol acetona se dejo demasiado tiempo en el frotis y no se lavó adecuadamente.

Fuente: Procedimientos de Laboratorio. Ministerio de Salud. INS. Perú.