Brucelosis

• La brucelosis es una enfermedad infecciosa, bacteriana, que afecta principalmente a los bovinos, caprinos porcinos y equinos. Es una enfermedad zoonótica de importancia mundial por afectar al hombre en ciertas circunstancias especiales.

• La Brucella es un microorganismo cocobacilar, no móvil, no esporulado, gran negativo de 0,5 x 1,5 um. Puede agruparse en pares o en cadenas cortas. Existen tres espeeies principales del género Brucella: Brucella abortus, Brucella suis, Brucella melitensis, siendo esta última la que produce mayor severidad clínica en el hombre.

• El diagnóstico microbiológico de brucelosis se basa en la demostración de la presencia de brucelas en el organismo y/o en la presencia de los anticuerpos anti-Brucella con títulos demostrativos en la sangre y, ocasionalmente, en otros líquidos como el líquido cefalorraquídeo, exudados, etc.

• Puesto que no se consigue siempre el aislamiento de la brucela, es obligatorio recurrir para el diagnóstico al empleo de métodos serológicos.

 * Si tomamos en consideración la estructura antigénica del género Brucella y la respuesta inmune del paciente, las pruebas serológicas se pueden agrupar según  el antígeno o la clase de inmunoglobulina (IgM o IgG) que interviene en la reacción.

• Las pruebas que se usan en el diagnóstico serológico de brucelosis son:

 - Prueba de aglutinación en placa.

 - Prueba de aglutinación en tubo.

 - Prueba de 2-Mercaptoetanol.

 - Rosa de Bengala.

 - Anticuerpos bloqueadores y el fenómeno de zona que se observa en prueba en tubo.

Atención:

*Tanto los antígenos como los sueros deben estar a temperatura ambiente por lo menos una hora antes de realizar la prueba.

*Los antígenos para diagnóstico deben mantenerse en refrigeración a una temperatura de 4 - 8°C. Se debe evitar su congelación, porque quedan inutilizados definitivamente.

 

 - Aglutinoscopio.

 - Placa o lámina de vidrio dividida en 72 cuadrados de 3,0 a 3,5 cm por lado.

 - Pipetas graduadas para medir: 0,08, 0,04, 0,02, 0,01, 0,005 ml (puede  usarse pipetas de 0,2 ml graduadas al milésimo o al centésimo).

 - Gotero calibrado que dé exactamente 0,03 ml por gota.

 - Agitadores de metal, de plástico o palitos de dientes. 

 - Un cronómetro.

 - Sueros control positivo y negativo.

 - Tubos de ensayo 13 x 100 mm.

 - Pipetas serológicas de 10 y 5 ml.

 - Jeringas de 2 ml de capacidad con aguja N° 16 y 21/2 pulgadas de longitud.

 - Micropipetas de 5 - 50 ul, de 20 - 200 ul y otra de 200 - 1 000 ul de rango.

 

Brucelosis

• Prueba de aglutinación rápida en placa
• Prueba de Rosa de Bengala
• Prueba en tubo y del 2-Mercaptoetanol 

• Uno de los mayores problemas que existe en el diagnóstico serológico es la calidad de los antígenos que se usan en la prueba.

• En el control de antígenos de Brucella se debe tener en cuenta los siguientes datos:

DATOS GENERALES

• Anotar en una ficha:

- El laboratorio productor del antígeno.

- El tipo de antígeno.

- La cepa utilizada.

- La fecha de expiración.

- El volumen de antígeno por frasco.

- Número de frascos y si viene con gotero o no.

ASPECTO DEL ANTÍGENO

• Anotar el color del antígeno comparándolo con el antígeno de referencia, si se tiene presencia de grumos o si cuando se deja reposar el antígeno se depositan impurezas en el fondo del frasco.

PUREZA

* Hacer una coloración de Gram debiendo observarse sólo la presencia de cocobacilos gramnegativos.

ESTERILIDAD 

• Sembrar una gota del antígeno en :

- Un tubo de agar tripticase soya.

- Un tubo de caldo dextrosado con indicador de Andrade.

- Un tubo con agar Saboraoud.

• Observar por 7 días. No deben crecer gérmenes en ninguno de los medios.

CONTROL DE pH

• Medir el pH, tanto del antígeno de prueba como del antígeno estándar, utilizando un potenciómetro o papeles indicadores de pH, debiendo estar dentro de un rango adecuado para el antígeno que se prueba.

 

Fuente: Procedimientos de Laboratorio. Ministerio de Salud. INS. Perú.