Agar Lisina Hierro (LIA)
FUNDAMENTO
Es un medio para detectar enzimas que descarboxilan o desaminan la lisina en bacilos gramnegativos.
Adicionalmente detecta enzimas que producen sulfuro de hidrógeno y gas proveniente de la glucosa.
Prueba de descarboxilación de la Lisina:
Si la bacteria posee la enzima descarboxilasa, la descarboxilación de la lisina produce cadaverina, un producto terminal alcalino que acentúa el color violeta del medio. Un requerimiento previo de la descarboxilación es un pH ácido, el cual se logra con la fermentación de la glucosa. Esta reacción se lleva a cabo en anaerobiosis, por lo que se observa en la parte profunda del medio.
Prueba de desaminación de la Lisina:
La desaminasa de la lisina actúa solo en ambiente de aerobiosis por lo que se verá en la parte inclinada.
La desaminación de la lisina termina en productos cetoácidos que en combinación con el Fe+++, (proveniente del citrato de amonio férrico) hacen que la molécula combinada se observe de color rojo intenso. El indicador de pH no interviene en este caso. Por esta razón, la lectura de esta reacción no se abrevia con los símbolos de ácido (A) sino como R (rojo).
No existen enterobacterias que posean las dos enzimas (descarboxilasa y desaminasa de la lisina) por lo que sólo se tiene que observar, o una de ambas reacciones o la ausencia de ambas. Cuando no hay desaminasa ni descarboxilasa, en la parte inclinada se observará una alcalinización del medio por crecimiento y muerte bacteriana, la cual hará que esta parte se observe de color violeta (K) y en la parte profunda, acidificación por los productos terminales de la fermentación de la glucosa. En este caso, la parte profunda se observará de color amarillo (A).
Producción de Sulfuro de Hidrógeno:
La presencia de la enzima tiosulfatasa actuará sobre el tiosulfato de sodio y se producirá H2S, que en presencia del hierro proveniente del citrato de amonio férrico, formarán un precipitado de color negro.
Producción de Gas:
La presencia de la enzima deshidrogenasa fórmica actuará sobre el ácido fórmico proveniente de la fermentación de la glucosa y en consecuencia, habrá gas de CO2 y H2.
COMPOSICIÓN
Nutriente: Peptona
Sustratos: Lisina, glucosa, citrato de amonio férrico, tiosulfato de sodio
Indicador de pH: Rojo fenol
Temperatura de Incubación: 35-37oC
Tiempo de incubación: 18-24 horas
SUSTRATO ENZIMA PRODUCTO TERMINAL
Descarboxilación o desaminación de la lisina:
Lisina » Lisina Decarboxilasa » Cadaverina
Lisina » Lisina Desaminasa » Ácido acetocarbónico
Fermentación de carbohidratos:
Glucosa » Glucosa 6 fosfato » Ácido pirúvico
Deshidrogenasa Ácidos mixtos
Producción de gas:
Ácido Fórmico » Deshidrogenasa fórmica » CO2
Producción de H2S
Tiosulfato de sodio » Tiosulfatasa » H2S
(incoloro)
Precipitado ║
de color negro «═ Sales de hierro
PREPARACIÓN
Preparar de acuerdo con las indicaciones del fabricante.
• Autoclavar a 121 °C, 15 libras / pulg2 por 15 minutos.
• Distribuir aproximadamente 5 mL en tubos de 13 x 100. Dejar enfriar en posición inclinada, para producir una columna de aproximadamente 3 cm de altura y sobre ella, una superficie inclinada de por lo menos la misma longitud.
TÉCNICA DE INOCULACIÓN
Rotular el tubo que contiene el medio de cultivo.
El medio debe ser inoculado con la misma UFC que se sembró en TSI.
Introducir el asa ven forma vertical hasta unos 2-3mm antes de llegar al fondo. Tener cuidado de no tocar el fondo del vidrio del tubo porque puede entrar aire atmosférico y se anulan las condiciones de anaerobiosis. Repetir dos veces mas este procedimiento, de tal manera que las tres punciones se hagan en los vértices de un triángulo imaginario.
Estriar la parte inclinada del agar desde el fondo a la parte superior con un movimiento en forma de S a medida que se retira el asa del tubo.
Incubar el tubo.
Leer la reacción bioquímica del medio.
Fuente: Manual de Procedimientos Bacteriológicos en Infecciones Intrahospitalarias. MINSA-INS. 2005. Manual de Procedimientos de Bacteriología Médica del CNDR/MINSA edición 2004
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