OBTENCIÓN DE MUESTRAS
a. Aspirado de bubón
MATERIALES
- Alcohol yodado.                                 
- Alcohol al 70%. 
- Algodón.                                          
- Solución salina estéril.
- Una jeringa de 10 cc, aguja N° 20.      
- Medio de transporte Cary y Blair.
- Láminas portaobjetos.                        
- Fenol al 5%.
 
MÉTODO PUNCION - ASPIRACIÓN
1. Ubicar los bubones (axilar o inguinal) y seleccionar el que aproximadamente mida 3 cm o más de diámetro.
2. Desinfectar dos veces la piel del bubón con alcohol yodado, descartando el algodón cada vez, y una tercera vez con alcohol al 70%. Antes de la punción debe haberse evaporado.
3. Sosteniendo la jeringa entre el índice y el pulgar de la mano derecha introducir la aguja en el bubón.
4. Con la mano izquierda, tirar lentamente del émbolo de la jeringa. Deberá entrar en ésta, un líquido que puede ser sanguinolento, proveniente del bubón.
5. En el caso que no entre líquido alguno en la jeringa, cargar la jeringa con 2ml de solución salina estéril e inyectar en el bubón, empujar suavemente el émbolo con el pulgar. Imprimir a la aguja introducida en el bubón un movimiento circular, a continuación, tirar lentamente el émbolo, para así obtener el líquido seroso.
6. Retirar la jeringa y limpiar con alcohol al 70% el sitio de la punción. 
7. Sostener la jeringa en posición vertical, con la aguja hacia abajo e inocular parte del aspirado del bubón en el medio de transporte Cary y Blair. El resto del aspirado se usará para el frotis. Dejar caer una gota de la muestra contenida en la jeringa y extenderla con la misma aguja sobre una lámina portaobjetos formando una capa delgada. Dejar secar el frotis a temperatura ambiente.
8. Descartar el material usado (jeringa y aguja) en fenol al 5%.
 
b. Órganos de pacientes fallecidos
• La obtención de órganos de paciente fallecido, con diagnóstico de sospecha de peste, es de suma importancia.
• En un cuerpo no refrigerado (24 - 48 horas) realizar autopsia inmediatamente, obtener muestras de hígado, bazo y tejido de nódulo linfático (bubón).
• Si no se puede procesar inmediatamente, se puede guardar hasta por 6 meses en medio de transporte Cary y Blair o Thioglicolato a 4°C. Se tiene la posibilidad  de recuperar en un 100% por cultivo el agente etiológico, así como realizar  inmunfluorescencia directa.   
• En un cuerpo no refrigerado (después de 48 horas) obtener muestras de hígado, bazo y tejido de nódulo linfático (bubón) y procesar inmediatamente.
• Se tiene la posibilidad de recuperar en un 20% por cultivo el agente etiológico, así como realizar inmunofluorescencia directa.
 
PROCESAMIENTO DE MUESTRAS
MÉTODO
 
MEDIO DE AGAR SANGRE AL 6%
• El medio de agar sangre al 6% , es el medio sólido estándar que se usa para el cultivo de Yersinia pestis. 
• En caso de muestras de aspirado de bubón, esputo, órganos, sembrar  directamente la muestra en el medio, la muestra se estría en la superficie del medio e incuba por 24 horas a 37 °C. 
• La Yersinia pestis crece con colonias translúcidas blanco grisáceas:
- A las de 24 horas de incubación, se observan colonias pequeñas como cabeza de alfiler. ·
- Después de una incubación de 48 horas, las colonias  miden aproximadamente 1 - 2 mm de diámetro y son blanco grisáceas y más opacas.
- Para su confirmación diagnóstica enviar al Laboratorio de Referencia Regional.
 
CALDO INFUSIÓN CEREBRO CORAZÓN (BHI)
• El caldo de infusión cerebro corazón es el medio estándar usado en  el laboratorio para el aislamiento primario, crecimiento y caracterización de Yersinia pestis. 
• Antes de proceder a la inoculación de las muestras, el medio debe encontrarse a temperatura ambiente.
• Realizar con el asa de siembra la inoculación de la muestra en un tubo con tapa rosca que contenga 10 ml de caldo. Incubar a 37 °C durante 24 a 48 horas.
• Crecen como pequeños cúmulos de células en los lados y fondo del tubo; el resto del caldo permanece claro. 
• Para su confirmación diagnóstica enviar al Laboratorio de Referencia Regional.
 
Fuente: Procedimientos de Laboratorio. Ministerio de Salud. INS. Perú.

Identificación Bacterias

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