Coloración Gram - Modificación de Kopeloff
Cristal violeta alcalino
(1) Solución A
Cristal Violeta 10 g
Agua destilada 1000 mL
Disolver el colorante en el agua destilada.
Almacenar en un frasco color ámbar. Rotular con fecha de un año de expiración. Almacenar a temperatura ambiente.
(2) Solución B: Bicarbonato de sodio
Bicarbonato de sodio 50 g
Agua destilada 1000 mL
Disolver el bicarbonato en el agua. Rotular con fecha de un año de expiración. Almacenar a temperatura ambiente.
Solución de Lugol
Hidróxido de sodio 4 g
Agua destilada 25 mL
Cristales de yodo 20 g
Yoduro de potasio 1 g
Agua destilada 925 mL
Disolver el hidróxido de sodio en 25 mL de agua destilada en un frasco oscuro.
Agregar el yodo, yoduro de potasio y disolverlos bien.
Gradualmente agregar 975 ml de agua destilada, mezclando bien después de cada adición.
Precaución: El yodo y yoduro de potasio son corrosivos. Evitar la inhalación, ingestión o contacto con la piel.
Decolorante
Etanol 95% 700 mL
Acetona 300 mL
Combinar y mezclar en un frasco color ámbar. Rotular con fecha de un año de expiración.
Almacenar a temperatura ambiente.
Precaución: El etanol y la acetona son inflamables.
Colorante de Contraste: Safranina
Safranina O, certificad 20 gr
Etano 95% 100 mL
Agua destilada 1000 mL
En un frasco de un litro agregar solo suficiente etanol para disolver la safranina (aproximadamente 50 mL). Agregar agua destilada a la solución de safranina.
Rotular con fecha de un año de expiración.
Almacenar a temperatura ambiente.
PROCEDIMIENTO
– Cubrir el frotis con la solución A. Agregar aproximadamente 5 gotas de la solución B.
– Colorear 2 – 3 minutos cuidando que no se seque.
– Enjuagar completamente con la solución de lugol y descartar.
– Agregar más solución de lugol para que cubra la lámina y dejarlo por 2 minutos.
– Manteniendo la lámina en posición inclinada agregar el decolorante y enjuagar inmediatamente.
– Colorear con safranina al menos 30 segundos.
– Enjuagar con abundante agua de caño.
– Dejar secar.
Fuente: Manual de Procedimientos Bacteriológicos en Infecciones Intrahospitalarias. MINSA-INS. 2005
reactivos, coloración gram kopeloff
- Visto: 3830