Medio Base Andrade
FUNDAMENTO
Medio enriquecido para demostrar fermentación de hidratos de carbono por cepas de Listeria. Algunas cepas fermentan lentamente entonces tenemos que esperar 48 horas más.
COMPOSICIÓN
Proteosa peptona .................................10 g
Extracto de carne .................................... 3 g
Cloruro de sodio .................................... 5 g
Indicador de Andrade ...................... 10 ml
Agua destilada................................1000 ml
Fucsina ácida ......................................0.5 g
Agua destilada....................................100 ml
Hidróxido de sodio 1N .................... 16 ml
Preparación: Disolver la fucsina ácida en agua destilada, luego agregar hidróxido de sodio 1N.
Si luego de algunas horas la fucsina ácida no está lo suficientemente decolorada agregar 1 ó 2 ml más de hidróxido de sodio 1N. El contenido de colorante de los diferentes productos o lotes de fucsina ácida varía ampliamente y la cantidad de hidróxido de sodio 1N necesario para cada producto debe especificarse en el rótulo.
El reactivo mejora al envejecer por lo tanto es conveniente preparar cantidades suficientes para almacenar.
Agua destilada ..............................................100 ml
Preparación: Preparar solución al 10% de cada hidrato de carbono con agua destilada y tubo estéril.
Los hidratos de carbono que pueden ser autoclavados: adonita, dextrosa, dulcita, inositol, manita, salicina. Los medios que contengan glicerol deben autoclavarse 10 minutos a 121 ºC. Esterilizar en autoclave a 121º C durante 15 minutos.
Los hidratos de carbono que no deben ser autoclavados: arabinosa, celobiosa, lactosa, ramnosa, sacarosa, xilosa. Estos deben ser esterilizados por filtración. Filtrar la solución en forma estéril, a través de una membrana filtrante de 0.22 μ. Realizar control de esterilidad de la solución filtrada en caldo nutritivo.
PREPARACIÓN DEL MEDIO
Mezclar los ingredientes del medio base, disolver mediante calentamiento suave Ajustar el pH 7,1 – 7,2 luego de agregar el indicador. Fraccionar en volúmenes de 9 ml en tubos de vidrio con tapa a rosca. Esterilizar 15 minutos a 121 ºC. Agregar 1 ml de la solución de hidrato de carbono a 9 ml del medio base estéril. Si se preparan volúmenes pequeños, mantener la relación. Concentración final 1%
REALIZACIÓN DE LA PRUEBA
Inocular al medio completo una ansada ó 0,1 ml de un cultivo líquido. Incubar durante 24-48 horas a 35 ºC.
LECTURA E INTERPRETACIÓN
Reacción positiva (acidificación): viraje al rosado
Reacción negativa: medio sin cambio. Dado que algunas cepas de Listeria fermentan los hidratos de carbono lentamente, si el perfil de fermentación no es aceptable luego de 48 horas, los medios deben ser incubados durante 48 horas más.
CONTROL DE CALIDAD
Controlar la esterilidad de las soluciones.
Fuente: Servicio Bacteriología Especial Departamento de Bacteriología Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas A.N.L.I.S. “Dr. Carlos G. Malbrán” (2008). Manual de Procedimientos Aislamiento, identificación y caracterización de Listeria monocytogenes. Buenos Aires: Callejo, R. , Prieto, M. , Martínez, C. , Aguerre, L. , Rocca, F. y Martínez G.
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