Orto-Nitro para-Fenil Galactosidasa (ONPG)

FUNDAMENTO

Las bacterias fermentadoras de lactosa poseen tanto lactosa permeasa como b-galactosidasa, dos enzimas necesarias para la producción de ácido en la prueba de fermentación de la lactosa.

La permeasa es necesaria para que la molécula de lactosa pueda penetrar en el interior de la célula bacteriana, donde la b-galactosidasa puede degradar el enlace galactósido, produciendo glucosa y galactosa.

Las bacterias no fermentadoras de lactosa, carecen de ambas enzimas y son incapaces de producir ácido a partir de la lactosa. Las bacterias fermentadoras lentas de lactosa carecen de la enzima b-galactósido permeasa, o su actividad es deficiente; pero poseen la enzima b-galactosidasa y dan reacción de ONPG positiva.

La prueba ONPG detecta la enzima b-galactosidasa mucho más rápido que la misma prueba de fermentación de lactosa. Y es útil para la identificación de los fermentadores tardíos de la lactosa deficientes en b-galactósido permeasa.

- La o-nitrofenil-b-D- galactopiranósido (ONPG) es similar a la lactosa, excepto porque la glucosa ha sido sustituida por un grupo orto-nitrofenilo.

- El ONPG permeabiliza la pared bacteriana más rápidamente que la lactosa y bajo la acción de la b-galactosidasa (que si poseen los fermentadores lentos de lactosa), se hidroliza a galactosa y o-nitrofenol.

- El o-nitrofenol es un compuesto que no tiene color cuando está unido al D-galactopiranósido, pero es amarillo en su forma libre (no unido), lo que permite la visualización de la hidrólisis.

 

COMPOSICIÓN

Sustrato: O-nitrofenil-b-galactopianósido.

Termperatura de incubación: 35-37oC.

Tiempo de incubación: 18-24 horas.

 

TÉCNICA DE INOCULACIÓN

En un tubo que contenga 0.5 mL de agua destilada estéril, agregar un inóculo de la cepa problema. Hacer una suspensión cuya densidad debe ser mayor que la escala 0.5 de MacFarland.

Agregar a esta suspensión el disco de ONPG.

 

Fuente: Manual de Procedimientos de Bacteriología Médica del CNDR/MINSA edición 2004