FUNDAMENTOS

Es un medio de cultivo selectivo y diferencial, contiene nutrientes necesarios para el desarrollo de Listeria spp. Es diferencial para Listeria spp. debido a que el producto de la hidrólisis de esculina en presencia de iones férricos forma un compuesto fenólico de color negro. La selectividad para Listeria spp., se obtiene por el agregado del suplemento selectivo para Agar base Oxford modificado, debido a que contiene antibióticos que inhiben total o parcialmente el desarrollo de la flora acompañante presente en la muestra.

COMPOSICIÓN

Agar base
Agar base Columbia................................................ 39 g
Esculina .......................................................................1 g
Citrato férrico de amonio ...................................... 0.5 g
Cloruro de litio ......................................................... 15 g
Agua destilada..................................................... 1000 ml

Suplemento (para 500 ml de medio)
Cicloheximida .......................................................200 mg
Sulfato de colistina ................................................ 10 mg
Acriflavina................................................................2.5 mg
Cefotetan....................................................................1 mg
Fosfomicina ................................................................5 mg
Etanol 96% v/v........................................................ 2.5 ml
Agua destilada........................................................ 2.5 ml

Preparación: Disolver ingredientes sólidos en la mezcla de etanol / agua. Esterilizar por filtración.

PREPARACIÓN

Suspender los ingredientes en agua destilada y calentar hasta disolución. Esterilizar a 121 ºC durante 15 minutos. Enfriar a 50 ºC y agregar estérilmente los suplementos. Ajustar pH ±7.0. Distribuir en placas de Petri (15 ml aproximadamente) y solidificar.

REALIZACIÓN DE LA PRUEBA

Inocular e incubar las placas a 35 - 37 ºC durante 18 – 48 horas.

LECTURA E INTERPRETACIÓN

Las colonias características de Listeria spp. se muestran como pequeñas, grisáceas, rodeadas de halo negro. A las 48 horas se puede observar colonias con reflejos verdosos y centro deprimido.

CONTROL DE CALIDAD

Controlar la esterilidad del medio
Listeria monocytogenes ATCC 19114: Buen desarrollo. Colonias pequeñas, oscuras, con halo oscuro
Listeria ivanovii ATCC 19119: Buen desarrollo. Colonias pequeñas, oscuras, con halo oscuro
Escherichia coli ATCC 25922: Desarrollo inhibido
Enterococcus faecalis ATCC 29212: Desarrollo inhibido
Proteus mirabilis ATCC 43071: Desarrollo inhibido

Fuente: Servicio Bacteriología Especial Departamento de Bacteriología Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas A.N.L.I.S. “Dr. Carlos G. Malbrán” (2008). Manual de Procedimientos Aislamiento, identificación y caracterización de Listeria monocytogenes. Buenos Aires: Callejo, R. , Prieto, M. , Martínez, C. , Aguerre, L. , Rocca, F. y Martínez G.

Identificación Bacterias

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