VIH
PRINCIPIOS GENERALES
• Para hacer el diagnóstico de infección por VIH, se emplean pruebas para un diagnóstico preliminar (tamizaje) y confirmatorias, que detectan anticuerpos en muestras de sueros.
• Las pruebas inmunológicas ligadas a enzimas (ELISA) sa usan para diagnóstico preliminar basado en la detección de los anticuerpos contra VIH .
• El suero o plasma son los elementos más comunes usados para la detección de anticuerpos. Deben guardarse congelados en el caso de que la prueba no pueda realizarse inmediatamente luego de la recolección.
• Los procedimientos más comúnmente usados se clasifican como pruebas de ELISA indirecto, competitivo y de captura.
• Los antígenos usados en estas pruebas pueden ser derivados de virus lisados o producidos por recombinación genética o sintéticamente.
• Los anticuerpos son producidos en animales y pueden ser monoclonales o policlonales.
• Estos reactivos se incluyen en los paquetes (kits) de las pruebas comerciales, ya sea fijados a fase sólida o empaquetados separadamente junto con otros reactivos.
• Todos los juegos de las pruebas incluyen especímenes de control positivo y negativa que deben ser incluidos durante cada examen para asegurar la validez de los resultados de la prueba.
PRUEBA DE ELISA INDIRECTO
FUNDAMENTO
• La muestra de suero se diluye en el soporte en el que se encuentra inmovilizado el antígeno. Se incuba por un período específico de tiempo y a una temperatura exacta de acuerdo a las instrucciones del fabricante.
• Si las muestras de suero contienen los anticuerpos específicos, éstos formarán un complejo antígeno - anticuerpo y permanecerán unidos al soporte. La muestra de suero se elimina por lavado.
• Luego, agregar anticuerpos antiinmunoglobulinas totales humanas conjugadas con peroxidasa. Incubar a la temperatura indicada por el fabricante.
• Este conjugado se unirá al complejo antígeno - anticuerpo, si este último se produjo en el paso 2 del proceso.
• Realizar un nuevo lavado y agregar el substrato enzimático.
• En los casos en que se haya unido el conjugado, la reacción genera un producto
coloreado proporcional a la concentración de anticuerpos en la muestra.
* La concentración de anticuerpos es detectada por el espectrofotómetro a una longitud de onda determinada según los procedimientos del fabricante.
• La lectura de resultados positivos se basa en la aparición de un color que se puede detectar ya sea visualmente o con un espectrofotómetro.
• Es la prueba más usada.
PRUEBA DE ELISA COMPETITIVO
FUNDAMENTO
• Es un método indirecto modificado para detectar anticuerpos VIH.
• El anticuerpo VIH en la muestra positiva compite con el anticuerpo marcado con la enzima por los lugares reactivos en los antígenos ligados al soporte de fase sólida.
• Por lo tanto, ambos, la muestra y el anticuerpo marcado con la enzima son añadidos al mismo tiempo.
• El anticuerpo de la muestra positiva se ligará al antígeno, y por lo tanto evitará que los anticuerpos marcados con enzima se junten con el antígeno.
• Esto limitará la cantidad de enzima disponible para reaccionar con el substrato y no se producirá ningún color para casos de muestras positivas con anticuerpos a VIH.
• En contraste, las muestras que son negativas para anticuerpos a VIH permitirá a la gran mayoría de los anticuerpos marcados con enzima ligarse al antígeno fijado al soporte.
• Al agregar el substrato de la enzima resultará en el desarrollo de un color similar al control negativo.
PRUEBA DE ELISA CON ANTÍGENO DE CAPTURA
FUNDAMENTO
• Esta prueba puede ser realizada como una prueba indirecta o competitiva.
• Un anticuerpo monoclonal (específico para un determinante antigénico) es ligado a la fase sólida.
• Un reactivo con el antígeno específico del VIH se añade enseguida a la fase sólida, con el fin de que el antígeno se ligue al anticuerpo monoclonal.
PROCEDIMIENTO
I. Después de un período de incubación y de lavado, el suero que se va a examinar es añadido e incubado.
2. La fase sólida es luego lavada y se añade la inmunoglobulina anti-Ig humana marcada con la enzima, se incuba y se lava.
3. Añadir el substrato de la enzima, mezclar e incubar.
4. Si es positiva, en la muestra de suero se produce color.
Fuente: Procedimientos de Laboratorio. Ministerio de Salud. INS. Perú.
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