Malonato y Fenilalanina Deshidrogenasa (Caldo Malonato Fenilalanina)
 
FUNDAMENTO
Evalúa la capacidad del microorganismo de utilizar el malonato como única fuente de carbono y la desaminación de la fenilalanina, en forma combinada. Las enterobacterias no tienen la capacidad enzimática de realizar las dos reacciones simultáneamente, por lo que, o se observa la utilización del malonato o la desaminación de la lisina. Las bacterias que no utilizan el malonato no poseen la enzima fenilalanina desaminasa, por lo que es posible reacciones de malonato y fenilalanina desaminasa negativas.
 
COMPOSICIÓN
Nutriente: Extracto de levadura.
Sustrato: Malonato de sodio y L-fenilalanina.
Amortiguadores: Fosfato de potasio mono básico, fosfato de potasio dibásico, cloruro de sodio.
Indicador de pH: Azul de bromotimol.
Temperatura de incubación: 35-37oC.
Tiempo de incubación: 18-24 horas, máximo 2 días.
 
SUSTRATO ENZIMA PRODUCTO TERMINAL
Fenilalanina Fenilalanina Acido fenil
desaminasa pirúvico
Compuesto de HCl + Hierro III
color verde musgo
 
TÉCNICA DE INOCULACIÓN
Rotular el tubo que contiene caldo.
Con un asa recta, tomar un inóculo del agar nutritivo o TSA.
Inclinar el tubo e inocularlo, tocando la superficie interna del tubo, en el ángulo agudo del
menisco formado por el caldo.
Incubar el tubo.
Leer la reacción bioquímica del medio.
 
Utilización del Malonato:
Control de Calidad:
Klebsiella pneumoniae 
Resultado: Malonato positivo. Hay viraje de color del verde claro al azul intenso.
Escherichia coli 
Resultado: Malonato negativo. No hay viraje de color. El medio conserva su color verde.
 
Desaminación de la fenilalanina:
Si el malonato es negativo se realiza la prueba de fenillalanina, agregando 1 gota de HCl (Ácido clorhídrico). En este momento el caldo se torna amarillo y luego 2 gotas de Fe2Cl3 (Cloruro férrico).
Control de Calidad:
Escherichia coli 
Resultado: No hay viraje de color. El medio se observa de color amarillo.
Proteus mirabilis 
Resultado: Hay viraje de color del verde claro al verde musgo
 
Fuente: Manual de Procedimientos de Bacteriología Médica del CNDR/MINSA edición 2004

Identificación Bacterias

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