Malonato y Fenilalanina Deshidrogenasa

Malonato y Fenilalanina Deshidrogenasa (Caldo Malonato Fenilalanina)

 

FUNDAMENTO

Evalúa la capacidad del microorganismo de utilizar el malonato como única fuente de carbono y la desaminación de la fenilalanina, en forma combinada. Las enterobacterias no tienen la capacidad enzimática de realizar las dos reacciones simultáneamente, por lo que, o se observa la utilización del malonato o la desaminación de la lisina. Las bacterias que no utilizan el malonato no poseen la enzima fenilalanina desaminasa, por lo que es posible reacciones de malonato y fenilalanina desaminasa negativas.

 

COMPOSICIÓN

Nutriente: Extracto de levadura.

Sustrato: Malonato de sodio y L-fenilalanina.

Amortiguadores: Fosfato de potasio mono básico, fosfato de potasio dibásico, cloruro de sodio.

Indicador de pH: Azul de bromotimol.

Temperatura de incubación: 35-37oC.

Tiempo de incubación: 18-24 horas, máximo 2 días.

 

SUSTRATO ENZIMA PRODUCTO TERMINAL

Fenilalanina Fenilalanina Acido fenil

desaminasa pirúvico

Compuesto de HCl + Hierro III

color verde musgo

 

TÉCNICA DE INOCULACIÓN

Rotular el tubo que contiene caldo.

Con un asa recta, tomar un inóculo del agar nutritivo o TSA.

Inclinar el tubo e inocularlo, tocando la superficie interna del tubo, en el ángulo agudo del

menisco formado por el caldo.

Incubar el tubo.

Leer la reacción bioquímica del medio.

 

Utilización del Malonato:

Control de Calidad:

Klebsiella pneumoniae 

Resultado: Malonato positivo. Hay viraje de color del verde claro al azul intenso.

Escherichia coli 

Resultado: Malonato negativo. No hay viraje de color. El medio conserva su color verde.

 

Desaminación de la fenilalanina:

Si el malonato es negativo se realiza la prueba de fenillalanina, agregando 1 gota de HCl (Ácido clorhídrico). En este momento el caldo se torna amarillo y luego 2 gotas de Fe2Cl3 (Cloruro férrico).