• El examen microscópico directo de frotis teñidos constituye una manera
eficiente para estudiar la presencia de bacterias en medios biológicos que
normalmente son estériles, como el líquido cefalorraquídeo y el liquido pleural.
• También se aplica a la orina centrifugada, esputo, pus y muestras que provienen del cuello del útero, vagina, bronquios, etc.
 
MATERIALES
ASA DE SIEMBRA
• Es un alambre, con una aleación de níquel y cromo, que por un extremo
se fija a un mango que lo sostiene y por el otro extremo se dobla formando un pequeño círculo de aproximadamente 2mm.
PORTAOBJETOS 
• Se debe limpiar con una mezcla de etanol y éter, mediante una gasa. El
portaobjetos deberá estar rotulado.
MECHERO DE BUNSEN O DE ALCOHOL
 
MÉTODO
1. Flamear el asa de siembra hasta que se ponga al rojo vivo, para lograrlo, colocar el asa por arriba de la porción azul de la llama, en posición vertical.
2. Dejar enfriar el asa, contar hasta 20.
3. Tomar una porción de la muestra que se va a examinar, colocando el asa en posición plana en la superficie del liquido.
4. Colocar el asa sobre el portaobjetos y aplanar ligeramente en el centro de éste.
5. Sosteniendo todavía el asa aplanada sobre el portaobjetos, mover trazando un espiral del centro a la periferia.
6. Dejar cierto espacio entre la muestra y cada uno de los cuatro lados del portaobjetos.
7. Dejar secar la muestra completamente al aire.
8. En caso de frotis para diagnostico citológico (cuello de útero, vagina, etc.), los frotis no se deben dejar secar, pues se alteraría la morfología de las células. En cuanto estén listos mientras están húmedos todavía, se fijan con alcohol absoluto y éter o laca especial en spray.
9. Flamear de nuevo el asa hasta que esté al rojo vivo para destruir las bacterias que se encuentren en ella, una vez usada.
10. Proceder a fijar, pasando el portaobjetos tres veces a través de la llama del mechero de Bunsen, con la muestra hacia arriba. Dejarlo enfriar antes de aplicar la tinción.
11. Hacer la tinción de frotis fijo, se tiene la tinción de Gram, de Ziehl y Neelsen.
12. Es preferible marcar un círculo alrededor del frotis con un lápiz graso, a fin de que se pueda ver más fácilmente.
 
Fuente: Procedimientos de Laboratorio. Ministerio de Salud. INS. Perú.