Caldo de Moeller
Caldo de Moeller para determinar Descarboxilación de Aminoácidos.
FUNDAMENTO
La base para descarboxilasa de Moeller se emplea para la diferenciación bioquímica de los bacilos entericos y microorganismos a fines, mediante pruebas que involucran la descarboxilación de los aminoácidos. Los aminoacidos más empleados son: Lisina, Ornitina y Arginina las cuales se agregan para obtener una concentración final de 1 o 2% en el medio base. Los aminoacidos se esterilizan por filtración, ya que la esterilización por calor desnaturaliza las proteinas.
A diferencia de la base de carbohidratos, la de Moeller lleva glucosa con el propósito de discriminar entre las reacciones positivas de las negativas. Una reacción de descarboxilación de aminoacidos alcaliniza el medio (contrario a los carbohidratos) por lo que el púrpura de bromocresol no variará significativamente de color. Si la bacteria no descarboxila el aminoacido contenido en el caldo, fermentará la glucosa produciendo ácidos que harán virar el púrpura de bromocresol al amarillo. De esta manera, el color púrpura indica descarboxilación y amarillo ausencia de descorboxilación.
La prueba de descarboxilación requiere de una atmósfera libre de oxígeno, por lo que el medio ya inoculado debe sellarse con aceite mineral estéril.
El medio tiene incorporado un indicador de pH combinado (púrpura de bromocresol y rojo cresol).
COMPOSICIÓN
Nutrientes: Peptonas, extracto de levadura, piridoxal.
Sustrato: Aminoácido según requerimiento. Dextrosa (glucosa) para discriminar los positivos de los negativos.
Indicador de pH: Púrpura de bromocresol y rojo cresol.
Temperatura de Incubación: 35-37oC.
Tiempo de Incubación: 18-24 horas.
SUSTRATO ENZIMA PRODUCTO TERMINAL
Lisina » lisina decarboxilasa » Cadaverina
Ornitina » ornitina descarboxilasa » Putrecina
Arginina » arginina dehidrolasa » Citrulina
NOTA:
El producto terminal de la arginina (citrulina) es convertido en ornitina, luego se da la descarboxilación y como producto final resulta la putrecina.
Las descarboxilasas son un grupo de enzimas que actúan sobre sustratos específicos, capaces de reaccionar con el residuo carboxilo (COOH) de los aminoácidos para formar aminas alcalinas. Cada enzima descarboxilasa es específica para cada aminoácido.
PREPARACIÓN
Preparar el medio de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
• Para determinar la actividad descarboxilasa de un determinado aminoácido, se agrega al caldo base en concentración del 1%. (L(+) lisina, o L(+) ornitina, o L(+) arginina).
• Generalmente no es necesario ajustar el pH cuando se emplea L arginina o L lisina, pero con a L ornitina hay que hacer el ajuste antes de la esterilización. El pH final debe ser de 6.8 ± ?? 0.2
• Conservar refrigerado (4 – 10° C).
TÉCNICA DE INOCULACIÓN
Rotular el tubo que contiene el caldo.
Con un asa recta, tomar un inóculo del agar nutritivo o TSA.
Inclinar el tubo e inocularlo, tocando la superficie interna del tubo, en el ángulo agudo del menisco formado por el caldo.
Volver el tubo a la posición vertical, lo cual tiene el efecto de sumergir el punto de inoculación bajo la superficie.
Agregue de 5 a 10 gotas de aceite mineral estéril.
Incubar el tubo.
Leer la reacción bioquímica del medio.
Fuente: Manual de Procedimientos Bacteriológicos en Infecciones Intrahospitalarias. MINSA-INS. 2005. Manual de Procedimientos de Bacteriología Médica del CNDR/MINSA edición 2004
caldo de moeller, descarboxilación de aminoácidos
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