Glucosa OF (Oxidación-Fermentación)

Glucosa OF o Medio de Hugh y Leifson

 

FUNDAMENTO

Los medios bioquímicos usados para las bacterias fermentativas no pueden ser aplicados a las bacterias oxidativas que producen ácidos débiles insuficientes para hacer virar el indicador de pH y debido a esto, Hugh y Leifson diseñaron un medio OF (oxidativo-fermentativo) que se adapta a las propiedades de los bacilos gramnegativos no fermentadores.

Los bacilos gramnegativos fermentadores oxidativos utilizan vías alternativas a la vía de Embden-Meyerhof a través de las cuales es oxidada la glucosa. El término oxidación significa la forma en que el ácido pirúvico transfiere sus iones hidrógeno. Al carecer de la enzimas deshidrogenasas, necesarias para oxidar el ácido pirúvico a ácido láctico y otros ácidos mixtos, las bacterias oxidativas transfieren los iones hidrógeno del ácido pirúvico al ciclo de Krebs, donde se une al oxígeno para formar agua.

Este medio es útil para la diferenciación de microorganismos no fermentadores. La consistencia semisólida del agar, el uso de azul bromotimol como indicador de pH y la inclusión de una pequeña cantidad de buffer de difosfato están destinados a aumentar la detección de ácidos.

 

COMPOSICIÓN

Nutrimentos: Peptona.

Sustrato: Glucosa.

Amortiguadores: Cloruro de sodio y fosfato de potásico dibásico.

Indicador de pH: Azul de bromotimol.

 

PROCEDIMIENTO

Rotular con la muestra los dos tubos necesarios para la prueba OF (oxidativo-fermentativo).

Con un asa recta, inocular una buena carga de la bacteria, introduciendo el asa hasta el fondo del tubo.

Utilizando el mismo inóculo, siembre otro tubo, de la misma manera que el anterior.

Con un gotero, deje caer 9 gotas (0.5 mm) de aceite mineral estéril, a uno de los tubos inoculados. Esto favorecerá un ambiente anaerobio.

Deje sin apretar el tapón de rosca del tubo sin aceite mineral para favorecer un ambiente aerobio.

Incubar ambos tubos a 35°C por 24 horas.

 

Fuente: Manual de Procedimientos de Bacteriología Médica del CNDR/MINSA edición 2004