• En esta prueba, el suero del paciente se diluye de manera seriada en tubos de ensayo.
 
MATERIALES
- Obtención del suero del paciente.
- Cloruro de sodio al 0,85% formalizado (0,5 ml de formaldehído por 100ml de solución salina).
- Antígeno de Salmonella O e H.
- Tubos 12 x 75 mm de fondo redondo.
- Gradillas.
- Pipetas serológicas de 1 ml y 5 ml.
- Baño maría.
- Fuente de luz adecuada.
 
MÉTODO
1. Colocar 8 tubos enumerados en una gradilla para cada suero a probar.   
2. Con la pipeta medir 0,9 ml de cloruro de sodio al 0,85% y depositarlo en el tubo 1 de cada hilera.
3. Con la pipeta medir 0,5 ml de cloruro de sodio al 0,85% y depositarlo en cada uno de los tubos restantes (tubo 2 al tubo 8).
4. Agregar 0,1 ml del suero paciente al tubo 1.
5. Mezclar bien el tubo.
6. Transferir 0,5 ml del tubo 1 al tubo 2. Mezclar a fondo.
7. Seguir llevando 0,5 ml del tubo 2 al tubo 3 y así sucesivamente hasta el tubo 7. Desechar los 0,5 ml del tubo 7 después de mezclar a fondo.
8. El tubo 8 es el tubo de control del antígeno.
9. Añadir 0,5 ml del antígeno (Salmonella O o H) a cada uno de los 8 tubos.
10. Agitar cada uno de los tubos para mezclar el antígeno y el suero.
11. Poner los tubos en un baño maría de acuerdo con lo siguiente:
- Antígeno de salmonella O, de 16 - 18 horas a 50°C.
- Antígeno de salmonella H, 1 hora a 50°C.
Es importante en esta prueba usar el tiempo y la temperatura recomendada y asegurarse que el baño maría está en un lugar libre de vibraciones mecánicas.
12. Las diluciones resultantes van desde 1 / 20 hasta 1 / 1 280, respectivamente.
 
LECTURA E INFORME
1. Utilizando una lámpara fluorescente contra un fondo negro, registrar el grado de aglutinación de la siguiente forma:
  4+     El 100% de las partículas están aglutinadas y  
           el líquido sobrenadante es transparente.  
  3+     El 75% de las partículas están aglutinadas y el
           líquido sobrenadante está ligeramente turbio. 
  2+     El 50% de las partículas están aglutinadas y el
           líquido sobrenadante está moderadamente
           turbio. 
  1+    El 25% de las partículas están aglutinadas y el
          líquido sobrenadante está turbio. 
 Negativo No es visible ninguna aglutinación y las
                 partículas permanecen como una
                 suspensión  turbia. Esta reacción debe
                 observarse en el tubo 8.
2. La aglutinación de los antígenos ("O", "H") tiene las siguientes características:
- Antígeno somático "O"
Se caracteriza por una aglutinación compacta, gruesa, la cual tiende a ser difícil de dispersar.
- Antígeno flagelar "H"
Tiene una aglutinación floculante y fina. Debe tenerse cuidado de no agitar una reacción de antígeno "H" demasiado, mientras se examina.
3. Título del suero
El título del suero que se informa corresponde a la última dilución del suero en que se produce una aglutinación de por lo menos 2+ (50%).
4. Se considera que 1/ 160 de título para el antigeno "O" es diagnóstico de Fiebre Tifoidea, pero es todavía más importante demostrar que este título va aumentando en pruebas sucesivas 1 - 2 semanas después.
5. Ejemplo de cálculos
 
Tub1  Tub2 Tub3 Tub4  Tub5 Tub6  Tub7     Resultado    
Diluc. Diluc. Diluc.Diluc. Diluc. Diluc. Diluc.
1/20  1/40  1/80 1/160 1/320 1/640 1/1280
2+     1+      -       -         -        -         -      Positivo 1/20
3+     2+     1+     -         -        -         -      Positivo 1/40
4+     3+     2+    1+       -        -         -      Positivo 1/80
4+     4+     3+    2+      1+      -         -      Positivo 1/160
4+     4+     4+    3+      2+     1+       -      Positivo 1/320
4+     4+     4+    4+      3+     2+      1+    Positivo 1/640
4+     4+     4+    4+      4+     3+      2+    Positivo1/1280
 
Fuente: Procedimientos de Laboratorio. Ministerio de Salud. INS. Perú.