Fermentación de Carbohidratos en Caldo
FUNDAMENTO
Esta prueba sirve para determinar la capacidad de un microorganismo de fermentar los carbohidratos (azúcares) produciendo ácidos o ácidos y gas visibles.
Se utiliza una base rica en nutrientes, cuyo indicador de pH es el púrpura de bromocresol. El carbohidrato requerido se agrega, ya sea en forma de discos comerciales impregnados o adicionando al caldo el carbohidrato previamente esterilizado por filtración.
La ventaja de usar discos es que la base sirve para todos los carbohidratos y que este se agrega al momento de ser requerido.
Para observar la formación de gas deben colocarse en forma invertida tubos de Durham, cerciorándose que el tubo quede completamente sumergido en el caldo.
COMPOSICIÓN
Nutriente: Peptonas y extracto de carne
Sustrato: Carbohidrato adicionado según el lote a preparar.
Amortiguador: Cloruro de sodio
Indicador de pH: Púrpura de bromocresol
Temperatura de Incubación: 35-37°C
Tiempo de Incubación: 18-24 horas si esta negativo se deja hasta 7 días.
PREPARACIÓN
• Caldo infusión corazón o extracto de carne 90 mL
• 10% de carbohidrato en agua 10 mL
• Púrpura de bromocresol, (1,6% en etanol 95%) 0,1 mL
• Repartir 3 mL en cada tubo de 12 mm x 75 mm con tapa de rosca y autoclavar a 121 °C x 10 minutos.
• Conservar los medios en refrigeración (4 – 10 °C).
TÉCNICA DE INOCULACIÓN
Rotular el tubo que contiene el caldo de púrpura de bromocresol simple.
Con un asa recta, tomar un inóculo del agar nutritivo o TSA.
Inclinar el tubo e inocularlo, tocando la superficie interna del tubo, en el ángulo agudo del menisco formado por el caldo.
Si el caldo utilizado no contiene el carbohidrato, proceda a tomarlo del frasco comercial que lo contiene. Utilice una pinza previamente flameada para extraerlo del frasco. Auxíliese de otra pinza (previamente flameada) para doblarlo e introdúzcalo hasta el fondo del caldo.
Incubar el tubo.
Leer la reacción bioquímica del medio.
Fuente: Manual de Procedimientos Bacteriológicos en Infecciones Intrahospitalarias. MINSA-INS. 2005. Manual de Procedimientos de Bacteriología Médica del CNDR/MINSA edición 2004
medios diferenciales, fermentación de carbohidratos
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