Coloración Gota Gruesa y Frotis

• La preparación de la gota gruesa se tiñe inmediatamente con Giemsa diluida

Los frotis se deben primero fijar durante 2 - 3 minutos con metanol.

 

- Probetas de 10, 50 y 100 ml. 

- Beaker o vaso plástico de trabajo.

- Un agitador de vidrio. 

- Una gradilla para portaobjetos.    

- Un cronómetro o reloj con segundero.

- Un frasco gotero con metanol.

- Colorante Giemsa (solución madre).

- Agua amortiguada puede ser reemplazada por agua de lluvia o agua hervida fría.

 

Método para colorear de 1 a 10 láminas.

1. Utilizar la probeta de vidrio para preparar colorante de Giemsa diluido al 5% con agua amortiguada de pH 7,2 en la proporción de 1 gota de Giemsa (solución madre) con 1 ml de agua amortiguada (o agua de lluvia o agua hervida fría).

2. Mezclar suavemente con una varilla de vidrio.

3. Si sólo es una lamina (gota gruesa) para colorear, se necesitará aproximadamente 1,5 ml de solución preparada. Si se tuviera que colorear 2 láminas, se necesitará 3 gotas de solución Giemsa (solución madre) por cada 3ml de agua amortiguada.

4. Antes de colorear verificar si las claves de las láminas coincidan con las solicitudes de investigación.

5. Colocar las láminas a través de dos varillas de vidrio. Cubrirlas suavemente con el colorante de Giemsa diluido. Nunca echar el colorante muy alejado de las láminas, porque pueden formarse "espumas" que dificultarían el examen microscópico.

6. Dejar reposar las láminas con el colorante por 10 minutos (la experiencia le indicará el tiempo correcto para cada lámina o grupo de láminas).

7. Transcurrido el tiempo indicado de coloración, lavar suavemente el colorante de la lámina añadiendo un chorro suave de agua limpia.

8. Colocar en una gradilla las láminas inclinadas, con la cara de sangre tenida hacia abajo, para eliminar el exceso de agua, facilitar el secado y protegerlos del polvo.

 

Método para colorear más de 10 láminas: Coloración en bloque

• Generalmente se usa cuando se realizan muestreos hemáticos masivos.

1. Previamente se debe conocer el diámetro y capacidad del beaker o vaso plástico de trabajo para calcular la cantidad de láminas que en posición vertical pueden ser coloreadas. Asimismo se debe conocer el volumen del colorante Giemsa diluido que se va a utilizar (calcular de acuerdo con el método anterior).

2. Colocar las laminas con las muestras hemáticas en el beaker o vaso, en

posición vertical, de 2 en 2 y separadas por tarjetas de cartón de 2 x 3cm de área, de tal manera, que los lados que contengan la muestra estén hacia las caras externas y entren en contacto con el colorante. Asegurar el bloque de láminas formadas, pasándole alrededor una liga o hilo de pabilo.

3. Preparar una cantidad suficiente de colorante de Giemsa diluido para llenar el beaker o vaso plástico.

4. Una vez que las láminas con las muestras se hayan colocado en el beaker o vaso plástico, llenar el recipiente lentamente con el colorante de Giemsa diluido. Evitar mojar los cartones. Tapar el beaker. 

5. Dejar las láminas en el colorante por 10 minutos, lejos de la luz del sol.

6. Transcurrido el tiempo indicado de coloración, quitar la tapa, sacar el bloque de láminas del recipiente con colorante y enjuagarlo sumergiéndolo y sacándolo alternativamente en un recipiente con agua limpia, hasta que no se desprenda colorante en el enjuague. Evitar mojar los cartones.

7. Dejar escurrir el agua del bloque. Colocarlo sobre papel toalla o papel higiénico y dejarlo secar.

8. Cuando esté seco, retirar las láminas del bloque, una por una, y colocarlas en la gradilla de madera, de modo que queden inclinadas y con la gota gruesa hacia abajo, evitando que la muestra toque algo.

 

Fuente: Procedimientos de Laboratorio. Ministerio de Salud. INS. Perú.