FUNDAMENTO

El medio de Loeffler se emplea para el diagnóstico de laboratorio de infecciones de la nariz y garganta, en especial para determinación de corinebacterios. Es útil para la demostración de cromogénesis, investigación ascosporas y en la prueba de la actividad proteolítica.

COMPOSICIÓN g/lt agua destilada

Suero de res                                                      70.0g
Caldo glucosado, infusión (sólidos, secos)        2.5g
Huevo (desecado, entero)                                 7.5g
Ph final                                                               7.6 +-
 

PREPARACIÓN

Se suspenden 80g del polvo en un litro de agua destilada que tenga una temperatura de 45°C. Los mejores resultados se obtienen agregando el polvo poco a poco, en tanto que el matraz se hace girar suavemente para incorporar un mínimo de aire. Cuando el polvo se haya mezclado bien, distribuya en tubos.

Coagule y esterilice por concentración durante 3 o más días sucesivos, cuando menos durante 6 horas, a 70°C en total.

Otro método de esterilización consiste en colocar tubos en posición inclinada, apilando no más de cuatro, con capas de papel abajo y arriba para evitar la coagulación rápida. Cerrando bien la autoclave, abrase el vapor y déjese que la presión llegue a 10 libras durante 20 minutos. No se debe permitir el escape de aire o vapor durante este tiempo. Entonces se abre la válvula de admisión del vapor y se deja escapar el aire, manteniendo la presión a 10 libras. Los cambios bruscos de presión causan formación de burbujas en el medio. Se cierra la valvula de salida cuando todo el aire haya salido desalojado por el vapor, y déjese que la presión alcance 15 libras manteniéndola durante 15 minutos. Se deja que la autoclave se enfrie lentamente.

Los cultivos inclinados preparados correctamente son de color blanco y gris suave. Deben incubarse antes de inocularlos para comprobarse la eficacia del proceso de esterilización.

INTERPRETACIÓN

1. Para el diagnóstico de la difteria

El medio de Loeffler se debe inocular inmediatamente o tan pronto como sea posible después de obtener la muestra. Los cultivos se examinan después de 8 a 24 horas de incubación haciendo frotis teñidos. Se pueden hacer cultivos paralelos en medio de agar con telurito para el aislamiento selectivo de patógenos y placas de agar sangre soya tripticasa estriadas de cultivos preliminares de Loeffler o de telurito inclinados.

2. Para investigar la actividad proteolítica de los aerobios

El medio se puede inocular directamente. Si sobre la superficie inclinada del medio Loeffler se vierte caldo con tioglicolato estéril, y se inocula, se puede observar la proteólisis producida por los aerobios o los anaerobios sobre el suero coagulado.

3. Para investigar pigmentos

Se siembra en estría la superficie inclinada y se incuba a la temperatura deseada. La superficie gris blanca del medio suministra un fondo excelente para esta determinación.

4. Para la investigación de ascosporas

Para esta investigación el medio de Loeffler puede ser muy útil. Antes de usarlo para este fin, debe eliminarse todo exceso de líquido y calentarse la parte superior inclinado sobre una llama hasta que se agriete. Las ascosporas se forman de preferencia sobre el área seca. Para conservar la sequedad puede ser necesario sustituir el tapón de algodón por una tapa de rosca.

Fuente: Medios de Cultivo en Microbiología Manual de Laboratorio. UNMSM. M. Mendo Rubio.

Identificación Bacterias

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