Agar Hierro Tres Azúcares o Triple Azúcares y Hierro (TSI)
 
FUNDAMENTO
Este medio se utiliza para determinar la capacidad de los bacilos gramnegativos para fermentar lactosa, sacarosa y glucosa, así como para determinar su capacidad de producir H2S (ácido sulfhídrico).
Fermentación de los Carbohidratos:
El medio contiene dos cámaras de reacción, en la parte inclinada se fermenta la sacarosa y la lactosa y en la parte profunda se fermenta la glucosa. Se puede fermentar los 3 carbohidratos o uno de ellos depende de la bacteria que se estudie.
Producción de Sulfuro de Hidrógeno:
Si la bacteria tiene la enzima tiosulfatasa, reacciona con el tiosulfato de Na como una fuente de azufre para la producción del sulfuro de hidrógeno, el cual es incoloro, pero al reaccionar con sales de hierro, en este caso citrato férrico, se produce un precipitado de color negro. Para que esto ocurra debe haber un pH ácido, lo cual se consigue con la fermentación de la glucosa.
Producción de Gas:
El primer paso es la fermentación de la glucosa, uno de cuyos productos terminales es el ácido fórmico.
Si la bacteria tiene la enzima deshidrogenasa fórmica, el ácido fórmico es descompuesto en CO2 y H2.
 
COMPOSICIÓN
Nutrientes: Peptona
Sustratos: Glucosa, Lactosa, Sacarosa, Sulfato Ferroso, Tiosulfato de Sodio
Indicador de pH: Rojo fenol
Temperatura de Incubación: 35-37oC
Tiempo de Incubación: 18-24 horas
NOTA: En caso de sospechar de Salmonella Typhi hay que dejar incubar hasta 48 horas.
 
SUSTRATO             ENZIMA                           PRODUCTO TERMINAL
Fermentación de Carbohidratos:
Lactosa                 Galactósido permeasa       Acido pirúvico
(glucosa+galactosa) Galactosidasa                   Acidos mixtos 
Glucosa                 Glucosa                           Acido pirúvico
                              6 fosfato deshidrogenasa   Acidos mixtos
Sacarosa               Invertasa                         Acido pirúvico
                                                                     Acidos Mixtos
Producción de gas:
Ac. Fórmico           Deshidrogenasa fórmica     CO2 + H2
Producción de H2S:
Tiosulfato              Tiosulfatasa                          H2S
de sodio                                                         (incoloro)
                                                                           
                              Precipitado color negro    Sales de hierro
                                                                     Citrato de Na
TÉCNICA DE INOCULACIÓN
Rotular el tubo que contiene el medio de cultivo.
Seleccionar una UFC y tomar un inóculo con un asa recta. El inóculo debe ser tomado de la superficie de la UFC. No tome la muestra por arrastre ya que puede llevar partes de otras UFCs.
Introducir el asa en forma vertical hasta unos 2-3 mm antes de llegar al fondo. Tener cuidado de no tocar el fondo del vidrio del tubo porque puede entrar aire atmosférico y se anulan las condiciones de anaerobiosis.
Estriar la parte inclinada del agar desde el fondo a la parte superior con un movimiento en forma de S a medida que se retira el asa del tubo.
Incubar el tubo.
Leer la reacción bioquímica del medio.
 
Fuente: Manual de Procedimientos de Bacteriología Médica del CNDR/MINSA edición 2004

Identificación Bacterias

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