Coloración del extendido

• El bacilo de la tuberculosis Mycobacterium tuberculosis, es resistente a los ácidos, es decir, una vez teñidos de rojo con fucsina básica fenicada, no se pueden decolorar por medio de ácidos o etanol.

• Antes de su uso, todos los colorantes y soluciones a emplearse deben ser previamente filtrados.

 

MATERIALES

- Una serie de láminas portaobjetos con extendidos fijados.

- Dos varillas de vidrio unidas por sus extremos, por un tubo de goma.

- Reactivos para coloración Fucsina basica fenicada, azul de metileno, fenol de cristales, ácido clorhídrico, alcohol de 95 ° y agua destilada.

- Un microscopio binocular, con objetivo de 100x.

- Aceite de inmersión.

- Un mechero de alcohol.

- Un soporte de madera para láminas portaobjetos.

 

MÉTODO

1. Colocar sobre los bordes del lavadero las 2 varillas de vidrio unidas por sus extremos, por un tubo de goma.

2. Colocar sobre este soporte de varilla, la serie de láminas fijadas con el extendido hacia arriba, el número hacia el lado del laboratorista. 

3. Cubrir la totalidad de la superficie del extendido con el colorante fucsina básica fenicada. No olvidar filtrar el colorante antes de efectuar la tinción.

4. Calentar suavemente con la llama del mechero de alcohol, por debajo de cada lamina portaobjetos, hasta la emisión de vapores, repetir el proceso  tres veces. No debe hervir la preparación. Si el volumen del colorante disminuye por  evaporación, agregar más colorante    hasta cubrir el extendido y dejar enfriar. El tiempo mínimo de coloración  con fucsina es de 5 minutos.

5. Eliminar la fucsina tomando la lámina por el extremo numerado, entre el dedo pulgar y el índice o con una pinza, inclinándola hacia delante y dejando caer agua corriente a baja presión sobre la parte que no tiene el extendido.    

6. Cubrir la totalidad de la superficie del extendido con la solución de alcohol ácido, durante 2 minutos, hasta obtener una coloración rosa pálido. De ser necesario, decolorar nuevamente y dejar reposar 1 minuto.

7. Eliminar el alcohol ácido, lavar nuevamente la lámina con agua corriente a baja presión, cuidando de no desprender la película que formó el extendido.

8. Cubrir la superficie del extendido con el colorante azul de metileno, durante 30 segundos a 1 minuto. Eliminar el azul de metileno y lavar cada lámina con agua a baja presión, por ambas  caras de la lámina portaobjetos. 

9. Colocar las láminas coloreadas en orden numérico sobre el soporte de madera y dejar secar al medio  ambiente.

 

Fuente: Procedimientos de Laboratorio. Ministerio de Salud. INS. Perú.