TIPO DE MUESTRA
Esputo.
 
EXAMEN DE LAS MUESTRAS
Macroscópico: observar aspecto (purulento, mucoide, salivar), volumen.
Microscópico:  tinción con Gram: observar polimonunucleares, bacterias (número, tipos diferentes, morfotipo predominante), células epiteliales (contaminación con flora oral).
 
CULTIVO
Medio: AS(Agar Sangre), AC(Agar Chocolate). 
Incubación:  CO2 durante 24-48 h a 35-37 °C 
 
AGENTES PATÓGENOS
Probables (método básico)
Strep. pneumoniae, H. influenzae, Staph. aureus, Klebsiella pneumoniae, especies de Pseudomonas, Branhamella catarrhalis, especies de Candida, especies de Aspergillus.
 
Importantes (no aislados por las técnicas anteriores)
(Obsérvese que es importante avisar al laboratorio si se sospechan estos agentes patógenos.)
Anaerobios:
• Si se sospecha absceso pulmonar, seguir el método básico e inocular en AS adicional e incubar en condiciones anaeróbicas durante 48 h.
 
Legionella pneumophila:
• Medio: agar sangre carbón para levaduras complementado con cisteina.
• lncubación:  CO2 durante 3-7 dias a 35-37 °C.
 
Micobacterias:
• Si se sospechan micobacterias, manejar el esputo en una cabina de seguridad.
• Antes del cultivo: descontaminar el esputo con un volumen igual de NaOH al 4% para matar otras bacterias. Neutralizar con HCI o diluir.
• Microscopia: Ziehl-Neelsen o tinción con auramina; observar los bacilos acidorresistentes.
• Cultivo agar Middlebrook o Lowenstein-Jensen (en frascos con tapón enroscado para evitar la desecación).
• lncubación: al aire* durante hasta 12 semanas a 35 °C para M. tuberculosis, 25, 35 y 43 °C para M. avium-intracellulare. [* Para otras micobacterias diferentes a la tuberculosis (MOTT) la incubación en oscuridad y en luz continua puede revelar pigmentos.]
• Otra alternativa es usar sistemas radiométricos de detección de crecimiento. Al medio comercial que contiene el radioisótopo añadirle esputo homogenizado y una mezcla de antibióticos para suprimir otros microorganismos respiratorios. Incubación: al aire durante 2-12 dias a 35 °C. El crecimiento se detecta mediante detección automatizada del CO2radiomarcado. 
 
Otros agentes patógenos importantes 
Virus como el virus respiratorio sincitial y el virus de la gripe detectados mediante inmunofluorescencia de lavados nasofaríngeos; Pneumocystis carinii (esputo); Paragonimus westermanii (huevos en el esputo).
 
Fuente: Microbiología Médica. Mims-Playfair-Roitt-Wakelin-Williams. Mosby.

Identificación Bacterias

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