• La prueba en tubo es una prueba confirmatoria (concluyente) de los resultados obtenidos con otras pruebas serológicas (ejemplo, la de placa). Detecta la presencia de inmunoglobulinas IgG e IgM. 
• Los sueros hemolizados no son adecuados para la aglutinación en tubo por la interferencia del fenol con la hemoglobina libre, que puede ocasionar pseudoaglutinaciones.
• La prueba del 2-Mercaptoetanol (2ME) es una prueba selectiva que detecta presencia de IgG y se debe efectuar simultáneamente con la prueba en tubo. 
• El 2ME es sensible a la luz y al calor y se deteriora rápidamente por exposición al aire. Se debe conservar en frascos de color ámbar herméticamente cerrados y en refrigeración.
• El título positivo del 2ME es considerado 1/25, es una buena prueba para el seguimiento del paciente.
 
MATERIALES
-Antígeno para la prueba en tubo: 1 ml de antígeno más 99 ml de solución salina al 0,85% fenolada al 0,5%.
- Antígeno para la prueba 2ME: 1ml de antígeno más 49 ml de solución salina al 0,85%.
- Solución de 2ME 0,1 molar: 0,39 ml de 2-Mercaptoetanol Q.P. más 49,61 ml de solución de cloruro de sodio al 0,85% (no utilizar salina fenolada).
 
MÉTODO
1. Colocar dos hileras de 5 tubos de 13 x 100 mm en una gradilla por cada muestra de suero.
2. Identificar el primer tubo de cada hilera con el número correspondiente al suero problema.
3. Destinar una de las hileras a la prueba de tubo y marcarla con una T. Marcar con una M la otra hilera en la que se hará la prueba de 2ME.
4. Con una pipeta de 0,2 ml se mide 0,08 ml de suero (primera dilución) manteniendo la pipeta en posición vertical sobre la pared interna del tubo, depositar en el fondo del mismo 0,08 ml.
Utilizando el mismo procedimiento, echar 0,04 ml de suero en el segundo tubo, 0,02 ml en el tercero, 0,01 ml en el cuarto y 0,005 ml en el quinto tubo.
5. Repetir el procedimiento descrito para depositar las mismas cantidades de suero en la segunda hilera de tubos.
6. Agregar 1 ml de solución de 2-ME a cada tubo de las hileras marcadas con M (prueba de 2ME), agitar y dejar a temperatura ambiente por 30 minutos.
7. Agregar 2 ml de antígeno fenolado a cada tubo de las hileras marcadas con T (prueba de tubo); agitar.
8. Añadir 1 ml de antígeno para 2-ME a los tubos marcados con M, agitar.
9. Incubar los tubos 48 horas a 37°C en estufa.
 
LECTURA
• Las muestras deben ser observadas en el aglutinoscopio, con luz indirecta y fondo opaco:
- Reacción positiva
La mezcla suero-antígeno es clara y se presentan grumos que no se rompen con una agitación suave.
- Reacción incompleta
La mezcla suero-antígeno es parcialmente clara y la agitación suave no rompe los grumos, si la aglutinación es mayor del 50% se reporta como positiva.
- Reacción negativa
La mezcla suero-antígeno no es clara y la agitación suave no revela grumos.
• Se reporta como título aquella dilución más alta en que se haya producido una reacción completa, tanto para la prueba en tubo como la de 2ME.
• Si se quiere conocer el título final del suero por el método de tubo se prepara dilución 1/16:
- 0,1 ml suero problema más 1,5 ml de suero fisiológico o suero negativo.
- A continuación, se procede como el método anteriormente descrito.
- La lectura será:
 ml               No Diluida    Diluida 1/16       
0,08            1/25                1/400
0,04            1/50                1/800
0,02            1/100             1/1600
0,01            1/200             1/3200 
0,005          1/400             1/6400
 
FENÓMENO DE ZONA O PROZONA
• El fenómeno de zona se observa en la prueba en tubo.
• El fenómeno de zona es la ausencia de aglutinación o presencia de aglutinación parcial en las diluciones bajas y aglutinación completa en las diluciones altas.
• Está usualmente asociado con sueros que contienen un alto título de aglutininas.
• Con este tipo de reacción se debe reportar la dilución positiva más alta como título final, e indicar las diluciones en las cuales ocurre el fenómeno de zona.
 
Fuente: Procedimientos de Laboratorio. Ministerio de Salud. INS. Perú.

Identificación Bacterias

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