• En esta prueba, el suero del paciente se diluye de manera seriada en tubos de ensayo.

 

- Obtención del suero del paciente.

- Cloruro de sodio al 0,85% formalizado (0,5 ml de formaldehído por 100ml de solución salina).

- Antígeno de Salmonella O e H.

- Tubos 12 x 75 mm de fondo redondo.

- Gradillas.

- Pipetas serológicas de 1 ml y 5 ml.

- Baño maría.

- Fuente de luz adecuada.

 

1. Colocar 8 tubos enumerados en una gradilla para cada suero a probar.   

2. Con la pipeta medir 0,9 ml de cloruro de sodio al 0,85% y depositarlo en el tubo 1 de cada hilera.

3. Con la pipeta medir 0,5 ml de cloruro de sodio al 0,85% y depositarlo en cada uno de los tubos restantes (tubo 2 al tubo 8).

4. Agregar 0,1 ml del suero paciente al tubo 1.

5. Mezclar bien el tubo.

6. Transferir 0,5 ml del tubo 1 al tubo 2. Mezclar a fondo.

7. Seguir llevando 0,5 ml del tubo 2 al tubo 3 y así sucesivamente hasta el tubo 7. Desechar los 0,5 ml del tubo 7 después de mezclar a fondo.

8. El tubo 8 es el tubo de control del antígeno.

9. Añadir 0,5 ml del antígeno (Salmonella O o H) a cada uno de los 8 tubos.

10. Agitar cada uno de los tubos para mezclar el antígeno y el suero.

11. Poner los tubos en un baño maría de acuerdo con lo siguiente:

- Antígeno de salmonella O, de 16 - 18 horas a 50°C.

- Antígeno de salmonella H, 1 hora a 50°C.

Es importante en esta prueba usar el tiempo y la temperatura recomendada y asegurarse que el baño maría está en un lugar libre de vibraciones mecánicas.

12. Las diluciones resultantes van desde 1 / 20 hasta 1 / 1 280, respectivamente.

 

1. Utilizando una lámpara fluorescente contra un fondo negro, registrar el grado de aglutinación de la siguiente forma:

  4+     El 100% de las partículas están aglutinadas y  

           el líquido sobrenadante es transparente.  

  3+     El 75% de las partículas están aglutinadas y el

           líquido sobrenadante está ligeramente turbio. 

  2+     El 50% de las partículas están aglutinadas y el

           líquido sobrenadante está moderadamente

           turbio. 

  1+    El 25% de las partículas están aglutinadas y el

          líquido sobrenadante está turbio. 

 Negativo No es visible ninguna aglutinación y las

                 partículas permanecen como una

                 suspensión  turbia. Esta reacción debe

                 observarse en el tubo 8.

2. La aglutinación de los antígenos ("O", "H") tiene las siguientes características:

- Antígeno somático "O"

Se caracteriza por una aglutinación compacta, gruesa, la cual tiende a ser difícil de dispersar.

- Antígeno flagelar "H"

Tiene una aglutinación floculante y fina. Debe tenerse cuidado de no agitar una reacción de antígeno "H" demasiado, mientras se examina.

3. Título del suero

El título del suero que se informa corresponde a la última dilución del suero en que se produce una aglutinación de por lo menos 2+ (50%).

4. Se considera que 1/ 160 de título para el antigeno "O" es diagnóstico de Fiebre Tifoidea, pero es todavía más importante demostrar que este título va aumentando en pruebas sucesivas 1 - 2 semanas después.

5. Ejemplo de cálculos

 

Tub1  Tub2 Tub3 Tub4  Tub5 Tub6  Tub7     Resultado    

Diluc. Diluc. Diluc.Diluc. Diluc. Diluc. Diluc.

1/20  1/40  1/80 1/160 1/320 1/640 1/1280

2+     1+      -       -         -        -         -      Positivo 1/20

3+     2+     1+     -         -        -         -      Positivo 1/40

4+     3+     2+    1+       -        -         -      Positivo 1/80

4+     4+     3+    2+      1+      -         -      Positivo 1/160

4+     4+     4+    3+      2+     1+       -      Positivo 1/320

4+     4+     4+    4+      3+     2+      1+    Positivo 1/640

4+     4+     4+    4+      4+     3+      2+    Positivo1/1280

 

Fuente: Procedimientos de Laboratorio. Ministerio de Salud. INS. Perú.