PRINCIPIOS GENERALES
• La prueba de RPR, es una prueba serológica no treponémica de floculación macroscópica.
• La prueba de RPR utiliza un antígeno que es una modificación del antígeno de VDRL, que contiene partículas de carbón para ayudar a visualizar de modo macroscópico la reacción, cloruro de colina para no inactivar los sueros y ácido etildiaminotetraacético (EDTA) para hacer más estable la suspensión.
• Para la prueba de RPR se usa dos tipos de muestras: suero y plasma.
• Dichas muestras no deben presentar turbidez (contaminado), no deben estar hemolizadas y deben estar a una temperatura de 23 - 29°C.
MATERIALES
- Kit de RPR 18 mm prueba en tarjeta. Este kit trae lo siguiente:
- Tarjeta con círculos marcados.
- Capilares.
- Antígeno.
- Aguja roma (sin bisel) N ° 20.
- Aplicadores de madera o plástico.
- Frasco gotero de plástico.
Atención:
-El kit debe conservarse en refrigeración.
-Tips (1 - 100ul).
-Rotador mecánico adaptable a 100 RPM.
-Frasco de vidrio de boca ancha con lejía.
-Sueros control ( reactivo y no reactivo).
-Micropipetas de un canal graduable rango 5 - 50ul.
PRUEBA RPR CUALITATIVA
MÉTODO
1. Colocar la aguja sin bisel en el frasco gotero de plástico.
2. Colocar parte del antígeno (dependiendo del número de muestras a procesar en el frasco gotero de plástico y verificar que la gota de antígeno salga de forma uniforme a través de la aguja.
3. Colocar sobre cada uno de los círculos de la tarjeta, 50 ul (0,05 ml) de los sueros a evaluar, o una gota utilizando el aplicador del kit. No olvidar colocar los sueros control.
4. Con ayuda del aplicador extienda la muestra dentro del círculo sin salir del margen.
5. Agregar 17 ul (0,017 ml) de antígeno, con micropipeta o una gota con el gotero del kit, sobre las muestras a evaluar.
6. Colocar la tarjeta con las muestras sobre el rotador por 8 minutos a 100 RPM.
7. Si no cuenta con rotador, hacer rotar completamente la tarjeta con las dos manos, sobre una superficie plana, dando 100 movimientos circulares por minuto, durante 8 minutos.
8. Luego de los 8 minutos, tomar la tarjeta con ambas manos y balancearla para observar los grumos, sobre todo en casos de mínima reactividad.
9. Hacer la lectura bajo una lámpara de luz, de preferencia.
LECTURA E INFORME
Lectura Informe
Grumos grandes, medianos o pequeños, pero definidos. REACTIVO (R)
Sin grumos. NO REACTIVO (NR)
• Si se observan grumos definidos o pequeños, debe realizarse la prueba cuantitativa.
PRUEBA RPR CUANTITATIVA
MÉTODO
1. Colocar 50 ul (0,05 ml) de suero fisiológico al 0,9% del segundo al sexto círculo de la tarjeta.
2. Colocar 50 ul (0,05 ml) del suero problema en el primer circule y 50 ul (0,05ml) en el segundo círculo, mezclar bien en el segundo circulo.
3. Transferir 50 ul (0,05 ml) al tercer círculo, mezclar bien y transferir 50 ul (0,05ml) al cuarto círculo, mezclar bien.
4. Transferir 50 ul (0,05 ml) al quinto círculo y así sucesivamente hasta el sexto círculo.
5. Usando un aplicador, extender la mezcla en cada círculo comenzando en el sexto círculo y terminando en el primer círculo.
6. Agregar 17 ul (0,017 ml) de antígeno, con micropipeta o una gota con el gotero del kit, sobre las muestras a evaluar.
7. Colocar la tarjeta con las muestras sobre el rotador por 8 minutos a 100 RPM. Si no cuenta con rotador, hacer rotar completamente la tarjeta con las dos manos, sobre una superficie plana, dando 100 movimientos circulares por minuto, durante 8 minutos.
8. Luego de los 8 minutos, tomar la tarjeta con ambas manos y balancearla para observar los grumos, sobre todo en casos de mínima reactividad.
9. Reportar el título hasta la dilución en que se observe una reacción, inclusive una reacción muy fina, que considerará como reactivo mínimo
CUADRO DE TITULACIÓN Y RESULTADOS
C1 C2 C3 C4 C5 C6
Suero no Dilución Resultado
diluido 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32
Rm N N N N N Reactivo débil 0 dils
R Rm N N N N Reactivo 1 dils (1)
R R N N N N Reactivo 2 dils (1/2)
R R R N N N Reactivo 4 dils (1/4)
R R R R N N Reactive 8 dils (1/8)
R R R R R N Reactivo 16 dils (1/ 16)
R R R R R R Reactivo 32 dils (1/32)
C: Círculo N: No reactivo. R: Reactivo. Rm: Reactivo mínimo.
LIMITACIONES DE LA PRUEBA RPR
• Fenómeno de prozona (exceso de anticuerpos), en el cual la reactividad de un suero no diluido se ve inhibida. Puede sospecharse cuando se produce una Reacción mínima, o se aprecian grumos, bastante grandes mezclados con partículas sueltas de antígeno en la prueba cualitativa, por tanto, todo suero que presente algún tipo de reacción debe ser sometido a una prueba cuantitativa.
• Puede producirse falsos positivos en muestras de personas que usan narcóticos padecen de lupus eritematoso, mononucleosis, malaria, lepra, neumonía viral o hayan sido recientemente vacunadas.
Fuente: Procedimientos de Laboratorio. Ministerio de Salud. INS. Perú.