PRINCIPIOS GENERALES
• La tincion Gram sirve para clasificar las bacterias en dos grupos:
- Bacterias grampositivas, que se tiñen de azul violáceo oscuro.
- Bacterias gramnegativas, que se tiñen de rojo, grosella o rosado.
REACTIVOS
Solución de cristal violeta al 1%.
Solución de safranina.
Solución de Lugol.
Alcohol acetona.
Agua corriente.
MÉTODO
1. Fijar el frotis por calor suave y dejarlo enfriar.
2. Cubrir el frotis con cristal violeta al 1%, dejando que el colorante actúe por 1 minuto.
3. Enjuagar suavemente la preparación con agua corriente y dejarla escurrir.
4. Cubrir el frotis con solución de Lugol, dejando actuar por 2 minutos.
5. Enjuagar suavemente la preparación con agua corriente.
6. Cubrir el frotis con alcohol acetona por 1 minuto.
7. Enjuagar suavemente con agua corriente.
8. Cubrir el frotis con solución de safranina, por 30 segundos.
9. Enjuagar suavemente con agua corriente y dejar secar la preparación al aire libre.
LECTURA
• Observar al microscopio, utilizando el lente de inmersión
• Se deberá buscar:
Bacterias grampositivas: Se tiñen de azul violáceo oscuro, como estafilococo, estreptococos neumococos, enterococos, etc.
Bacterias gramnegativas: Se tiñen de color rojo, grosella o rosado, como gonococos, vibrios, enterobacterias.
ATENCIÓN
• Puede ocurrir una reacción grampositiva falsa porque:
- El frotis se ha fijado antes de que estuviera seco. ·
- El frotis ha sido demasiado grueso.
- Quedaron sedimentos en el frasco de la solución cristal violeta( debe filtrarse antes de usarlo).
-La solución de Lugol no se escurrió completamente.
- La solución de safranina se dejó demasiado tiempo en el frotis.
• Puede ocurrir una reacción gramnegativa falsa porque:
- No se dejó actuar suficiente tiempo la solución de Lugol.
- El alcohol acetona se dejo demasiado tiempo en el frotis y no se lavó adecuadamente.
Fuente: Procedimientos de Laboratorio. Ministerio de Salud. INS. Perú.