AGAR MAC CONKEY
COMPOSICIÓN
- Peptona 17,0 g
- Proteosa peptona 3,0 g
- Lactosa 10,0 g
- Sales biliares 1,5 g
- Cloruro de sodio 5,0 g
- Agar 13,5 g
- Rojo neutro 0,03 g
- Cristal violeta 0,001 g - pH 7,1
PREPARACIÓN
1. Para rehidratar el medio se suspenden 50 gramos de agar Mac Conkey en 1 000 ml de agua destilada fría.
2. Calentar hasta el punto de hervor para disolver el medio completamente.
3. Esterilizar en el autoclave durante 15 minutos a 121 °C.
4. Cuando el medio se ha enfriado a 50°C, repartir en placas Petri más o menos 20 a 25 ml por placa.
AGAR SALMONELLA SHIGELLA (SS)
COMPOSICIÓN
- Extracto de carne 5,0 g
- Proteosa peptona 5,0 g
- Lactosa 10,0 g
- Sales biliares 8,5 g
- Citrato de sodio 8,5 g
- Tiosulfato sódico 8,5 g
- Citrato férrico 1,5 g
- Agar 13,5 g
- Verde brillante 0,00033 g
- Rojo neutro 0,025 g - pH 7,0 +/- 0,1
PREPARACIÓN
1. Para rehidratar el medio preparado se suspende 60 gramos de agar salmonella shiguella en 1 000 ml de agua destilada fría.
2. Calentar hasta punto de hervor para disolverlo por completo.
3. Repartir el medio en placas Petri, más o menos 20 a 25 ml por placa.
No se debe esterilizar en autoclave.
AGAR TRIPLE AZUCAR HIERRO (TSI)
COMPOSICIÓN
- Extracto de carne 3,0 g
- Extracto de levadura 3,0 g
- Peptona 15,0 g
- Proteosa peptona 5,0 g
- Lactosa 10,0 g
- Sacarosa 10,0 g
- Glucosa 1,0 g
- Sulfato ferroso 0,2 g
- Tiosulfato do sodio 0,3 g
- Agar 15,0 g
- Rojo do fenol 0,024g
- Cloruro de sodio 5,0 g
PREPARACIÓN
1. Pesar 65 gramos de agar triple azúcar hierro (TSI) para 1 000 ml de agua destilada.
2. Calentar al fuego hasta mezclar completamente.
3. Esterilizar a 121 °C, durante 15 minutos.
4. Repartir en tubos, de tal manera que queden con 2,5 cm de fondo y 3,5 cm de tendido (medio inclinado).
THAYER-MARTIN MODIFICADO
COMPOSICIÓN
- Agar 10 g
- Medio base: para gonococos (GC) 36 g
- Hemoglobina 10 g
- Suplemento nutritivo 10 ml
- Solución de antibióticos 10 ml
- Agua destilada 1 000 ml - pH final 7,2 +/- 0,2 a 25°C
PREPARACIÓN
1. En un matraz de 250 ml colocar 125 "perlas de vidrio" (que sirven para obtener una buena mezcla) agregar los 10 gramos de hemoglobina y 125 ml de agua destilada, agitar hasta observar completa disolución.
2. En una probeta de 500 ml colocar un embudo de vidrio con filtro de gasa-algodón - gasa (a manera de sandwich) para filtrar la solución de hemoglobina. Completar a 500 ml con agua destilada y al final, colocar esta solución en un matraz de 2 litros para ser esterilizada en el autoclave.
3. En un matraz de 2 litros mezclar 36 gramos de medio de GC base y 10 gramos de agar en 500 ml de agua destilada, calentando hasta hervir para disolver completamente.
4. Esterilizar por separado el agar base GC y la solución de hemoglobina en autoclave a 121 °C por 15 minutos.
5. Mantener estas soluciones estériles en baño maría a la temperatura de 50 - 56°C.
6. Rehidratar el suplemento nutritivo con líquido rehidratante estéril y agitar para asegurar una completa disolución. Seguir las instrucciones del fabricante.
7. Rehidratar la solución de antibióticos con agua destilada estéril y dejar reposar 20 minutos. Seguir las instrucciones del fabricante.
8. Agregar al medio base 10 ml de suplemento nutritivo y 10 ml de solución de antibióticos, mezclando suavemente.
9. Mezclar suavemente la solución de hemoglobina al agar base y mantener en baño maría a la temperatura de 50 - 56°C hasta el momento de repartir el medio.
10. Repartir en placas estériles 15 a 20 ml por placa 100 mm de diamétro.
*Los medios que no van ser utilizados deben conservarse a temperatura de refrigeración (aproximadamente durante 6 semanas) protegidos con bolsas de plástico, con la finalidad de reducir al mínimo la deshidratación.
*Los medios almacenados a ambiente se conservan entre 2 - 3 semanas.
Fuente: Procedimientos de Laboratorio. Ministerio de Salud. INS. Perú.