• La Neisseria gonorrhoeae se desarrolla en los siguientes medios de cultivos:
- Selectivos: Thayer Martin modificado.
- Enriquecidos: Agar chocolate con suplemento de crecimiento.
• Estos cultivos exigen condiciones especiales de anaerobiosis a pH 7,3 y con atmósfera de 3 - 10% de CO2 y 70 - 80% de humedad. Las colonias se desarrollan en 18 - 24 horas.
MATERIALES
- Obtención muestra de secreción uretral, cervical, rectal, faríngea, ocular.
- Asa bacteriológica estéril.
- Hisopo de algodón estéril.
- Tubos o placas Petri conteniendo medios de Thayer Martin modificado o agar chocolate con suplemento de crecimiento.
- Estufa a 37 °C.
- Jarra de anaerobiosis o frasco de boca ancha con tapa (tipo lata de café, pintura u otro).
- Vela blanca.
- Gasa o algodón humedecido con agua de caño.
MÉTODO
SI LA MUESTRA HA SIDO TOMADA CON HISOPO
1. Debe sembrarse directamente en la placa conteniendo el medio de Thayer Martin modificado o agar chocolate enriquecido.
2. La siembra se realiza rotando el hisopo sobre el medio, en forma de "Z", procurando depositar toda la muestra y con el mismo hisopo diseminarla en todo el medio, por el método de dispersión-agotamiento.
Sl LA MUESTRA HA SIDO TOMADA DIRECTAMENTE CON EL ASA
Sembrar sobre el medio de cultivo, en forma de Z y luego con la misma asa se dispersa toda la muestra, por el método de dispersión - agotamiento.
INCUBACIÓN DE LAS PLACAS SEMBRADAS
* Debe tener un ambiente que contenga CO2 y humedad. Este ambiente se logra:
1. Usando una jarra de anaerobiosis o frasco de boca ancha con tapa (tipo lata de café, pintura u otro), colocar las placas sembradas (en forma invertida) en la jarra de anaerobiosis o frasco de boca ancha con tapa.
2. En la base de la jarra o en la última placa se coloca sobre una lámina portaobjetos, un pedazo de vela blanca encendida, para proporcionar una atmósfera de 3 - 10% de CO2; así mismo, se coloca un pedazo de gasa o algodón humedecido con agua de caño para darle una atmósfera de 70 - 80% de humedad (Este último paso se repetirá todas las veces que se abra la jarra o frasco).
3. Cerrar herméticamente la tapa de la jarra o frasco e incubar a 37°C hasta por 72 horas. La vela se apaga cuando se consuma el O2.
LECTURA
• Los cultivos deben examinarse cada 18 - 24 horas, hasta por 72 horas.
• Se informa como resultado negativo si no hay crecimiento de colonias después de 72 horas.
• Las colonias sospechosas de gonococos, después de 20 horas en medio de agar chocolate son pequeñas (2 - 5 mm), redondas convexas, brillantes, cremosas, mucoides, con bordes uniformes. Luego se vuelven ondeadas.
• En el medio selectivo de Thayer Martin modificado, las colonias gonocócicas aparecen generalmente como crecimiento selectivo.
IDENTIFICACIÓN PRESUNTIVA DE NEISSERIA GONORRHOEAE
• De las colonias que aparecen en el medio selectivo Thayer Martin modificado o agar chocolate, se hace la identificación presuntiva realizando todas estas pruebas:
- Coloración gram: Demostrando los diplococos gramnegativos característicos en un frotis de la colonia.
- Prueba de oxidasa: Reacción positiva.
- Prueba de superoxol: Reacción positiva.
IDENTIFICACIÓN CONFIRMATORIA DE NEISSERIA GONORRHOEAE
• Se realiza a partir de las colonias con identificación presuntiva, mediante:
- La prueba de utilización de carbohidratos, determinándose la producción de acidez a partir de carbohidratos esterilizados: glucosa, lactosa, maltosa y sacarosa a la concentración de 1 - 2%, contenidos en base agar cistina tripticasa.
INFORME
• RESULTADO POSITIVO
Si hay crecimiento de colonias con pruebas confirmatorias.
• RESULTADO SOSPECHOSO .
Si se ha realizado las pruebas de identificación presuntiva.
• RESULTADO NEGATIVO
Si no hay crecimiento de colonias después de las 72 horas.
Fuente: Procedimientos de Laboratorio. Ministerio de Salud. INS. Perú.