FUNDAMENTO
Es un medio que se utiliza para determinar la presencia de flagelos, así como las enzimas descarboxilasa de ornitina y triptofanasa. Por lo tanto, sirve para determinar la movilidad, descarboxilación de la orinitina y producción de indol.
Movilidad:
Algunas bacterias poseen flagelos y otras carecen de ellos. Este medio ayuda a diferenciar las móviles de las no móviles.
Producción de Indol:
Si la bacteria posee la enzima triptofanasa, el aminoácido triptófano será degradado en varios productos entre los cuales está el indol, el cual se hace visible al agregarle el reactivo de Kovac (pdimetilaminobenzaldehido) o Erlich con un color rosado intenso. Sin la presencia de la enzima y ausencia del indol, el reactivo se ve transparente.
Descarboxilación de la ornitina:
Detecta la presencia de la enzima descarboxilasa de la ornitina, que de estar presente desdobla la ornitina en putrescina, un producto con pH alcalino, lo que hace instensificar el color violeta del medio.
COMPOSICIÓN
Nutrientes: Peptona
Sustratos: Ornitina, glucosa y triptofano.
Indicador de pH: Púrpura de bromocresol
Temperatura de Incubación: 35-37°C
Tiempo de Incubación: 18-24 horas
SUSTRATO ENZIMA PRODUCTO TERMINAL
Triptófano » Triptofanasa » Indol
Orinitina » Ornitina descarboxilasa » Putrescina
Glucosa » Glucosa 6-fosfato » Acidos mixtos
Deshidrogenasa Acido pirúvico
TÉCNICA DE INOCULACIÓN
Rotular el tubo que contiene el medio de cultivo.
Con un asa recta, tomar un inóculo del agar nutritivo o TSA.
Introducir el inóculo en forma vertical, en un trayecto de 0.5cm, si el tubo contiene 2mL de MIO.
Retirar el asa a lo largo de la misma línea de punción del agar.
Incubar el tubo.
Leer la reacción bioquímica del medio. Para ver si hubo producción de indol se agregan 2 gotas del reactivo de Kovac. La presencia de indol se detecta por un rápido aparecimiento de un color rosado intenso en la parte superior del medio.
NOTA: Un movimiento excesivo del asa puede dar como resultado un patrón de crecimiento a lo largo de la línea de punción, que puede ser interpretada falsamente como movilidad positiva, al igual que una punción mas profunda que lo indicado.
Fuente: Manual de Procedimientos de Bacteriología Médica del CNDR/MINSA edición 2004