FUNDAMENTO
Es una agua peptonada que permite, mediante la adición de un reactivo específico, comprobar la reacción del indol.
COMPOSICIÓN
Peptona 20.0g
ClNa 5.0g
Agua destilada 1000.0ml
PREPARACIÓN
Se disuelve la peptona y el NaCl.
Cuando está a 50°C, se controla el ph a 7.0.
Se autoclava a 121°C x 15 min.
Se reparte 2ml por cada tubo de 10 x 100.
PROCEDIMIENTO
Se siembra la colonia por identificarse a partir del medio TSI o directamente del medio de aislamiento. Incubar por 24 horas a 37°C.
Luego de la incubación, agregar 3 ó 4 gotas del reactivo de kovacs, preparado de la siguiente manera:
Alcohol amílico o isoamílico 75ml
Ácido clorhídrico 25ml
Para-dimetil-amino-benzaldehido 5g
El reactivo debe ser preparado por lo menos 48horas antes y ser mantenido a 4°C.
INTERPRETACIÓN
La degradación del aminoácido triptofano contenido en la peptona,mediante una enzima produce un compuesto heterocíclico el indol, el cual en presencia del para-dimetil-amino-benzaldehido, en medio ácido produce un compuesto complejo coloreado,soluble en solvente orgánico, especialmente en el alcohol amílico, entonces se produce un anillo de color cereza y el microrganismo es Indol positivo. El complejo del triptófano con el p-DAR no es absorvible por el alcohol amílico.
En algunas circunstancias se suelen preparar el caldo úrea y el caldo INDOL en un mismo tubo. En este caso,se disuelven la peptona (del caldo peptonado) y los ingredientes del caldo úrea (excepto la úrea) en el B.M. y cuando el medio está a 50°C se agrega la úrea. Otras veces se agrega los ingredientes del caldo úrea sobre el agua peptonada estéril, cuando ésta 50°C y se esterlliza por filtración. Es un medio preparado asi, la lectura de úrea precede a la adición del reactivo KOVACS para el indol.
Es necesario recordar que para la úrea positiva el PH del medio es alcalino , y el rojo fenol vira al color cereza; mientras que para el indol el pH del medio es fuertemente ácido, por el HCL contenido en el reactivo KOVACS.
Por lo tanto una reacción es independiente de la otra, es decir, en el tubo puede leerse úrea positiva o indol positivo, o úrea negativa o indol positivo o viceversa, indistintamente.
Son úrea positivos: los Proteus.
Son úrea negativos: Shiguella, Escherichia, Salmonella, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella , Serratia, Providencia.
Fuente: Medios de Cultivo en Microbiología Manual de Laboratorio. UNMSM. M. Mendo Rubio.